[發明專利]鏈格孢酚單甲醚的磁免疫熒光定量檢測方法

在審

• 申請號: 201811595181.1
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109799332A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 滿燕;潘立剛;靳欣欣
• 申請（專利權）人: 北京農業質量標準與檢測技術研究中心
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發明提供鏈格孢酚單甲醚(AME)的磁免疫熒光定量檢測方法，其是一種基于H₂O₂介導CdTe QDs熒光淬滅的磁免疫分析新方法。由過氧化氫酶(CAT)?AME作為競爭性抗原，與樣品中的AME競爭性結合磁珠上的單克隆抗體，經磁分離后，上清中剩余的CAT?AME對H₂O₂進行降解，因此降低了H₂O₂對巰基丙酸量子點(MPA?CdTe QDs)的熒光淬滅率，并根據此原理來判斷樣品中AME的含量。利用本方法可以簡單、快速地實現果蔬樣本中AME的定量檢測，最低檢測限可達0.25pg/mL。

技術領域

本發明屬于食品安全監測領域，具體地說，涉及鏈格孢酚單甲醚的磁免疫熒光定量檢測方法。

背景技術

鏈格孢酚單甲醚(AME)是鏈格孢霉菌的主要次生代謝產物之一。它具有致癌性、致畸性，尤其是在食管癌的發生上尤為突出。因此，攝取鏈格孢毒素AME侵染的食品會對人體健康造成嚴重危害。目前科學家們已經在多種食品(如西紅柿、小麥、葡萄、大米、紅酒、燕麥片、大麥)中發現了AME的存在。因此，AME成為目前國內外科學家研究較多的主要的鏈格孢毒素之一。

當前，用于鏈格孢毒素AME檢測的方法主要依賴于液質聯用傳統檢測方法。然而，這些傳統的檢測方法通常需要大型、昂貴的儀器設備以及專業的技術人員，并且檢測只能在實驗室中進行，檢測時間長，費時費力。

當前，基于抗原-抗體的免疫分析技術已經被廣泛應用于食品分析領域。但是，目前僅有少數的文章報道了關于免疫分析技術在AME定量檢測中的應用。此外，傳統的免疫分析技術具有耗時長，需要大量的清洗步驟，容易引起孔與孔之間的交叉污染等弊端。并且傳統的免疫分析技術采用96孔板作為抗原或抗體的固相載體。與96孔板相比較，磁珠作為固相載體具有快的反應動力學、高的比表面積、低的基質影響等優點。目前磁珠已被廣泛用于構建多種新型免疫傳感技術，并且實現了目標分子的快速、高專一性的富集與分離。

發明內容

本發明的目的是提供鏈格孢酚單甲醚的磁免疫熒光定量檢測方法，以實現對實際樣本中殘留的鏈格孢毒素AME的快速、高靈敏檢測。

為了實現本發明目的，本發明提供的鏈格孢酚單甲醚的磁免疫熒光定量檢測方法，其是一種基于H₂O₂介導CdTe QDs量子點熒光淬滅的磁免疫分析新方法。由CAT-AME作為競爭性抗原，與樣品中的AME競爭性結合磁珠上的單克隆抗體，經磁分離后，上清中剩余的CAT-AME對H₂O₂進行降解，因此降低了H₂O₂對巰基丙酸量子點(MPA-CdTe QDs)的熒光淬滅率(MPA-CdTe QDs的熒光強度能被H₂O₂淬滅)，并根據此原理來判斷樣品中AME的含量。MPA-CdTe QDs熒光強度的改變與樣品中AME的含量呈線性關系。鏈格孢酚單甲醚的磁免疫熒光定量檢測方法的原理見圖1。

所述方法包括以下步驟：

A、Fe₃O₄磁珠-AME單抗復合物溶液的制備；

B、CAT-AME復合物溶液的制備；

C、巰基丙酸修飾的碲化鎘量子點(MPA-CdTe QDs)溶液的制備；

D、不同濃度的AME標準品溶液的制備；