[發(fā)明專利]一種β-痕跡蛋白檢測試劑盒及制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811594811.3
• 申請(qǐng)日: 2018-12-25
• 公開（公告）號(hào): CN109781990A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王春新;韋彥余;王軍峰;賈夢(mèng)玥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 無錫市人民醫(yī)院;江蘇龍維生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 蘇州六一專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32314
• 代理人: 顧傳虎

本發(fā)明涉及一種β?痕跡蛋白檢測試劑，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2，所述試劑R1主要由緩沖液1、穩(wěn)定劑1、防腐劑1、EDTA、增凝劑和保護(hù)劑1組成；所述試劑R2主要由交聯(lián)β?痕跡蛋白抗體的聚苯乙烯膠乳微球、緩沖液2、穩(wěn)定劑2、防腐劑2、保護(hù)劑2組成，其中聚苯乙烯膠乳微球與β?痕跡蛋白抗體之間以共價(jià)交聯(lián)方式連接。本發(fā)明還涉及該種β?痕跡蛋白檢測試劑的制備方法。該檢測試劑具有檢測靈敏、穩(wěn)定性高、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用該試劑制備的檢測試劑盒可廣泛應(yīng)用于腎臟疾病進(jìn)行篩查檢測、病情監(jiān)測、預(yù)后評(píng)估等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于制備檢測腎病試劑盒的試劑及其制備方法。

背景技術(shù)

臨床評(píng)價(jià)腎臟疾病進(jìn)展和嚴(yán)重程度，一般以腎功能為參考，腎功能一般以腎小球?yàn)V過率(GFR)反映。它是反映腎功能最重要的指標(biāo)。根據(jù)腎小球?yàn)V過率(GFR)標(biāo)志物來源，分外源性和內(nèi)源性。外源性標(biāo)志物包括菊粉(inulin)、碘海醇(iohexol)、51Cr-EDTA、99mTc-DTPA等。內(nèi)源性標(biāo)志物包括血清肌酐(Scr)、尿素(Urea)、β2-微球蛋白(β2-M)、β-痕跡蛋白(BTP)以及血清β痕跡蛋白(CystatinC，CysC)。

內(nèi)源性標(biāo)志物中，如α1微球蛋白、β2微球蛋白等小分子蛋白，因免疫、感染、飲食、肝病和腫瘤等腎外因素對(duì)其生成的影響而不能作為評(píng)價(jià)GFR的指標(biāo)。

目前臨床上最常用于反映腎小球?yàn)V過功能變化的指標(biāo)是Scr和肌酐清除率(Ccr)。Scr測定方法簡便，但葡萄糖、尿酸等代謝物，頭孢菌素、多巴胺等藥物都有可能干擾Scr測定。不同的飲食習(xí)慣和肌肉容量也會(huì)影響Scr水平，從而影響Scr反映GFR敏感性和特異性。Ccr較Scr測定敏感，但患者尿量收集很難做到準(zhǔn)確，特別對(duì)于腎功能不全的患者，由于腎小管代償性排泌肌酐增加，可以導(dǎo)致Ccr的高估。

CysC被證實(shí)是一個(gè)有價(jià)值的反映GFR的指標(biāo)，尤其在以肌酐為基礎(chǔ)的公式法GFR不能提供準(zhǔn)確估計(jì)時(shí)(肝硬化、肌肉丟失等)。同時(shí)也用于腎功能不全的早期檢測。然而，CysC的濃度受到糖皮質(zhì)激素和甲狀腺功能異常等非腎因素的影響。

β痕跡蛋白(beta trace protein，BTP，Hoffmann A,Nimlz M,ConradtS.Molecular characterization of beta-trace protein in human serum and urine:aprotential diagnostic marker for renal diease.Glycobiology,1997,7:499-506.)，又稱為前列腺素D合成酶，是一個(gè)低分子量蛋白質(zhì)，屬于Lipocalin蛋白質(zhì)超家族成員，含168個(gè)氨基酸，分子量在23～29KD(其分子量大小取決于糖化程度)，最早在1961年，發(fā)現(xiàn)BTP是人腦脊液中的主要蛋白，同時(shí)在人血清和尿液中也能測得。

研究發(fā)現(xiàn)血清β-TP與腎小球?yàn)V過功能有關(guān),它能夠較早地反映腎功能的輕微損傷,比臨床上常用的血肌酐(Scr)更靈敏。血清中β-TP不受性別、年齡、炎癥、體重、營養(yǎng)、感染、肌肉等影響，是一種較理想的反應(yīng)腎小球?yàn)V過濾的標(biāo)記物。

西門子公司研制的N Latex BTP試劑盒使用的抗體為常規(guī)制備(鼠抗、兔抗、羊抗)，存在跟血清中類風(fēng)濕因子或HAMA等交叉反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)檢測結(jié)果帶來干擾。

鑒于現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種β-痕跡蛋白檢測試劑盒及其制備方法，該試劑盒具有更好的檢測靈敏度，線性寬穩(wěn)定性佳及干擾小的特點(diǎn)，且該試劑盒成本低，適宜臨床推廣。

發(fā)明內(nèi)容