[發明專利]一種β-痕跡蛋白檢測試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 201811594811.3
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109781990A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 王春新;韋彥余;王軍峰;賈夢玥
• 申請（專利權）人: 無錫市人民醫院;江蘇龍維生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 蘇州六一專利代理事務所(普通合伙) 32314
• 代理人: 顧傳虎

1.一種β-痕跡蛋白檢測試劑，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2，其特征在于，所述試劑R1主要由緩沖液1、穩定劑1、防腐劑1、EDTA、增凝劑和保護劑1組成；所述試劑R2主要由交聯β-痕跡蛋白抗體的聚苯乙烯膠乳微球、緩沖液2、穩定劑2、防腐劑2、保護劑2組成，其中聚苯乙烯膠乳微球與β-痕跡蛋白抗體之間以共價交聯方式連接。

2.根據權利要求1所述的β-痕跡蛋白檢測試劑，其特征在于，所述的β-痕跡蛋白抗體為鼠抗人β-痕跡蛋白抗體、羊抗人β-痕跡蛋白IgG抗體、兔抗人β-痕跡蛋白IgG抗體、雞抗人β-痕跡蛋白IgY抗體的一種或者多種的組合。

3.根據權利要求2所述的β-痕跡蛋白檢測試劑，其特征在于，所述的β-痕跡蛋白抗體為雞抗人β-痕跡蛋白IgY抗體。

4.根據權利要求1所述的β-痕跡蛋白檢測試劑，其特征在于，所述試劑R1中的緩沖液1選自Hepes緩沖液、Tris-HCl緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼砂緩沖液中的任意一種，緩沖液的pH為7.0～9.0，濃度為25～500mmol/L；所述試劑R2中的緩沖液2選自PBS緩沖液、硼砂緩沖液、甘氨酸緩沖液、Hepes緩沖液、GOODS緩沖液、MOPS緩沖液中任意一種，緩沖液的pH為7.0～9.0，濃度為25～500mmol/L。

5.根據權利要求1所述的β-痕跡蛋白檢測試劑，其特征在于，所述試劑R1中的增凝劑包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3.5～7.5g/L，緩沖液1的pH值為7.2－7.6。

6.根據權利要求1所述的β-痕跡蛋白檢測試劑，其特征在于，所述試劑R1中的穩定劑1選自KCl、NaCl、CaCl2中的任意一種或幾種，其質量濃度為0.5％～10％；所述試劑R2中的穩定劑2采用離子穩定劑和懸浮穩定劑配合使用；其中離子穩定劑為NaCl、KCl、Na2CO3、Na2SO4或者K2SO4中的任意一種或幾種，懸浮穩定劑為PEG8000、蔗糖、甘油或者葡萄糖。

7.根據權利要求1所述的β-痕跡蛋白檢測試劑，其特征在于，所述試劑R1中的防腐劑1為疊氮鈉、硫柳汞或者ProClin300，所述試劑R2中的防腐劑2為疊氮鈉、硫柳汞或ProClin300；所述試劑R1中的增凝劑為PEG8000或者葡聚糖；所述試劑R1中的保護劑1為牛血清白蛋白；所述試劑R2中的保護劑2為牛血清白蛋白。

8.根據權利要求1所述的β-痕跡蛋白檢測試劑，其特征在于，所述試劑R2中的聚苯乙烯乳膠微球的表面官能團為氨基、羧基、酰肼、醛基或環氧基，聚苯乙烯乳膠微球的粒徑在100～600nm。

9.根據權利要求1所述的β-痕跡蛋白檢測試劑，其特征在于，所述試劑R1中的EDTA的濃度為10～100mmol/L。

10.制備權利要求1～9中任一項所述的β-痕跡蛋白檢測試劑的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)試劑R1的制備：在緩沖液1中加入穩定劑1、增凝劑、防腐劑1、保護劑1和EDTA，攪拌混合均勻，即得試劑R1；

(2)試劑R2的制備：

步驟一：將β-痕跡蛋白IgY抗體進行2-8℃透析，再用緩沖液2將β-痕跡蛋白IgY抗體稀釋至0.5-2mg/ml，得到β-痕跡蛋白IgY抗體稀釋液；將聚苯乙烯膠乳微球用蒸餾水離心、洗滌3次；

步驟二：用緩沖液2將經過步驟一洗滌后的聚苯乙烯膠乳微球稀釋到質量濃度為1％，再加入質量濃度為0.01％-0.1％的EDC，在室溫下攪拌反應15-45min，反應結束后10000-15000rpm離心洗滌以除去未反應的EDC，然后加入步驟一得到的β-痕跡蛋白IgY抗體稀釋液，室溫下攪拌反應15-45min，再加入終止液終止反應，將得到的反應液10000-15000rpm離心，用緩沖液2洗滌沉淀，重復離心洗滌3次，最后加入緩沖液2、防腐劑2、穩定劑2、保護劑2攪拌混合均勻即得試劑R2。