[發明專利]sll0528基因在提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性中的應用

有效

• 申請號: 201811591708.3
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109706104B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 陳谷;許白雪
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12P7/06;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 崔紅麗

1.sll0528基因在提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性中的應用，其特征在于：

過表達sll0528基因提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性，敲除sll0528基因降低集胞藻PCC6803乙醇耐受性。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：

所述的sll0528基因在構建對乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803菌株中的應用。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：

所述的sll0528基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：17所示。

4.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：

所述的乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803菌株的構建方法，包括如下步驟：

（1）以野生型集胞藻PCC6803基因組為模板，以序列表中SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8作為目的片段slr2030的上、下游引物，SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12為psbA2啟動子的上、下游引物，SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14為sll0528的上、下游引物，SEQ ID NO：15和SEQ IDNO：16為slr2031的上、下游引物，通過PCR擴增得到slr2030，psbA2啟動子，sll0528，slr2031；以質粒pET-30b為模板，以SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10作為引物，PCR擴增得到卡那霉素抗性基因km^r片段；

（2）用限制性內切酶HindⅢ和PstⅠ，PstⅠ和PstⅠ，PstⅠ和XbaⅠ，XbaⅠ和SmaⅠ，SmaⅠ和EcoRⅠ依次剪切獲得的slr2030，km^r，psbA2啟動子，sll0528，slr2031目的片段，并將其插入載體質粒pUC118中，得到同源重組雙交換質粒P3031；

（3）將同源重組雙交換質粒P3031以自然轉化的方式轉入集胞藻PCC6803中，得到的轉化子以不同濃度的卡那霉素進行篩選，并在DNA水平上進行鑒定，最終得到sll0528基因的過表達株，命名為Osll0528。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述的乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803菌株，在含有1.5～3.0%v/v乙醇的BG11培養基中的生長狀態明顯優于野生型藻株。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：

所述的乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803菌株，在含有1.5～2.0%v/v乙醇的BG11培養基中的生長狀態明顯優于野生型藻株。

7.權利要求4～6任一項中所述的乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803菌株的應用，其特征在于：

所述的乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803菌株用于構建生產燃料乙醇的基因工程菌。