[發明專利]sll0528基因在提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性中的應用

有效

• 申請號: 201811591708.3
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109706104B
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 陳谷;許白雪
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12P7/06;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 崔紅麗

本發明公開一種sll0528基因在提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性中的應用，屬于工業微生物領域。本發明通過同源重組的方法對集胞藻PCC6803中的sll0528基因進行敲除和過表達，得到一種對乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803藻株Osll0528。在加有不同濃度(1.5％，2.0％，2.5％，3.0％v/v)乙醇的BG11培養基中，該藻株的生長狀態明顯優于野生型藻株。本發明得到的乙醇耐受性藻株對構建生產燃料乙醇的基因工程菌具有重要的理論和實際意義，具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明屬于工業微生物領域，具體涉及一種sll0528基因在提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性中的應用。

背景技術

能源危機以及化石燃料造成的環境污染和溫室效應的日益加重，激起了人們對可再生綠色生物燃料的興趣。生物乙醇是一種綠色可再生能源，其出現不僅減少了對石油資源的依賴，也大大減少了二氧化碳的排放。藍藻可以利用二氧化碳通過光合作用直接合成生物乙醇，已經展現了在未來生產綠色燃料方面的巨大潛力。集胞藻PCC6803作為一種光合藍藻，因其易于進行分子生物學操作，已廣泛被用作基因工程菌用于生物乙醇的開發。

但是目前為止生物乙醇的產量還遠遠不能滿足工業化生產的要求，其中一個重要的原因就是集胞藻PCC6803對乙醇的耐受能力差。因此，提高集胞藻PCC6803對于乙醇的耐受能力，對于未來工業化生產生物乙醇，解決能源危機具有重要的作用。

發明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的目的在于提供一種sll0528基因在提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性中的應用。

本發明的另一目的在于提供一種對乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803藻株的構建方法。

本發明的另一目的在于提供通過上述構建方法構建得到的一種對乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803藻株。該藻株可應用于構建生產生物乙醇的基因工程菌。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種sll0528基因在提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性中的應用。

過表達sll0528基因提高集胞藻PCC6803乙醇耐受性，敲除sll0528基因降低集胞藻PCC6803乙醇耐受性。

進一步的，所述的sll0528基因在構建對乙醇耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803菌株中的應用。

所述的sll0528基因的核苷酸序列如(a)、(b)或(c)所示：

(a)sll0528基因的cDNA序列，如SEQ ID NO：17所示；

(b)sll0528基因的基因組DNA序列；

(c)與(a)或(b)具有90％以上同源性且編碼相同功能蛋白的DNA序列。

本發明通過將野生型與構建的集胞藻PCC6803中sll0528基因的敲除株Δsll0528以及過表達株Osll0528的比較，鑒定出了一種與乙醇耐受相關的基因sll0528，其序列號如SEQ ID NO：17所示，并成功得到了一株可以顯著提高乙醇耐受性的藻株。

一種sll0528基因敲除株Δsll0528的構建方法，包括如下步驟：