[發明專利]一種人凝血酶原復合物中間產品液態保存的方法

有效

• 申請號: 201811591509.2
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109593747B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發明（設計）人: 喬福鋒;師秀梅;鄭志華;陳政;靳曉東;徐良
• 申請（專利權）人: 山東泰邦生物制品有限公司
• 主分類號: C12N9/64
• 分類號: C12N9/64;C12N9/74;C12N9/96
• 代理公司: 濟南舜昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 37249
• 代理人: 侯緒軍

本發明涉及一種人凝血酶原復合物中間產品液態保存的方法，步驟為：（1）血漿吸附，使用已平衡的凝膠攪拌吸附已去除冷沉淀的血漿；（2）凝膠洗滌，洗滌凝膠，去除非人凝血酶原復合物中蛋白成分；（3）凝膠洗脫，收集洗脫液，將步驟（2）洗滌結束的凝膠使用洗脫液進行洗脫，收集洗脫液；（4）洗脫液的超濾；（5）中間產品的保存，將濃縮液在中間產品非凍結狀態下進行密封、保存；（6）檢測。在本發明條件下保存人凝血酶原復合物中間產品，使中間產品能較好的保持活性；有利于生產過程的控制，降低制品在固液不同狀態轉換下不穩定和污染的風險；不需凍存和復融過程，有利于提高生產效率。

技術領域

本發明屬于生物制藥血液制品生產領域，具體涉及人凝血酶原復合物中間產品液態保存的方法。

背景技術

人凝血因子Ⅸ（Factor IX，FIX）是一種由肝臟合成的維生素K依賴性血漿蛋白，分子量約57KD，血漿含量1～7mg/L，是內源性凝血途徑中的重要因子。FIX與其他維生素K依賴的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ理化性質相似，與以上三種因子共同組成人凝血酶原復合物（Prothrombin Complex Concetrate，PCC）。

目前，PCC的主要生產工藝為兩步凝膠吸附：以去除冷沉淀的血漿或Cohn組分Ⅲ為原料，經DEAE Sephadex A-50吸附后，收集洗脫液；再次經使用DEAE Sephadex A-50或其他凝膠，例如，DEAE Sephrose Fast Flow等，吸附，收集洗脫液，并經病毒滅活、冷凍干燥等步驟處理，獲得最終產品。PCC的生產工藝較復雜，生產周期相對較長，經常會在第一次凝膠吸附后將中間產品進行冷凍保存，進行下一步操作時再將凍存的制品進行復融。但是由于凝血因子極易被激活、不穩定的特性，中間產品組分凍存后再次復融會引起凝血因子活性喪失，同時保存期間存在中間品微生物污染的風險，也給操作帶來不便。

發明內容

本發明提供了一種人凝血酶原復合物中間產品液態保存的方法，目的是解決以人凝血因子Ⅸ（FIX）為主要成分的血液制品中間產品的制備及保存的問題，能使上述中間產品在液態狀態下保持FIX活性的穩定。

本發明的技術方案為，將以FIX為主要成分的中間產品的緩沖液調整至氯化鈉濃度≥0.3mol/L，在保存容器內密封，液態保存，溫度范圍可以根據氯化鈉濃度的不同進行調整，以不凍結為準。

一種人凝血酶原復合物中間產品液態保存的方法，具體步驟為：

（1）血漿吸附

使用已平衡的DEAE Sephadex A-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖 A-50）凝膠攪拌吸附已去除冷沉淀的血漿；

（2）凝膠洗滌

使用洗滌液洗滌上一步收集的凝膠，去除非人凝血酶原復合物（PCC）蛋白成分，洗滌液排空，不收集；

（3）凝膠洗脫，收集洗脫液

將步驟（2）洗滌結束的凝膠使用洗脫液進行洗脫，收集洗脫液于已清潔的超濾罐中；

（4）洗脫液的超濾

將步驟（3）獲得的洗脫液濃縮至適合保存的體積，獲得濃縮液；當中間產品的緩沖液中氯化鈉濃度≥0.3mol/L時，不超濾。

（5）中間產品的保存

將濃縮液在中間產品非凍結狀態下進行密封、保存；

（6）檢測：FIX活性檢測，根據《中國藥典》2015年版三部人凝血因子Ⅸ效價測定法檢測Ⅸ活性。