[發(fā)明專利]一種人凝血酶原復(fù)合物中間產(chǎn)品液態(tài)保存的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811591509.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109593747B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 喬福鋒;師秀梅;鄭志華;陳政;靳曉東;徐良
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東泰邦生物制品有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/64
• 分類號(hào): C12N9/64;C12N9/74;C12N9/96
• 代理公司: 濟(jì)南舜昊專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 37249
• 代理人: 侯緒軍

1.一種人凝血酶原復(fù)合物中間產(chǎn)品液態(tài)保存的方法，其特征在于，具體步驟為：

（1）血漿吸附

使用已平衡的DEAE Sephadex A-50凝膠攪拌吸附已去除冷沉淀的血漿；

（2）凝膠洗滌

使用洗滌液洗滌上一步收集的凝膠，去除非人凝血酶原復(fù)合物（PCC）蛋白成分，洗滌液排空，不收集；

（3）凝膠洗脫，收集洗脫液

將步驟（2）洗滌結(jié)束的凝膠使用洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液于已清潔的超濾罐中；

（4）洗脫液的超濾

將步驟（3）獲得的洗脫液濃縮，獲得濃縮液；當(dāng)中間產(chǎn)品的緩沖液中氯化鈉濃度≥0.3mol/L時(shí)，不超濾；

（5）中間產(chǎn)品的保存

將濃縮液在中間產(chǎn)品非凍結(jié)狀態(tài)下進(jìn)行密封、保存；

（6）檢測(cè)：FIX活性檢測(cè)，根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版三部人凝血因子Ⅸ效價(jià)測(cè)定法檢測(cè)Ⅸ活性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，平衡DEAE Sephadex A-50凝膠的平衡液中氯化鈉的濃度為0.06-0.20mol/L，枸櫞酸鈉的濃度為0.01-0.03mol/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，攪拌吸附已去除冷沉淀的血漿時(shí)攪拌速度為10-50r/min。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，攪拌吸附已去除冷沉淀的血漿時(shí)攪拌速度為15-30r/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，吸附條件為：pH 7.2±0.3，時(shí)間30-60min。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，pH為7.2±0.1。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，凝膠與血漿比例為每1kg血漿使用1-1.8g凝膠。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，凝膠用量為每1kg血漿使用1-1.5g凝膠。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，洗滌液中氯化鈉濃度為0.15-0.25mol/L，枸櫞酸鈉濃度為0.01-0.02mol/L；洗滌次數(shù)為1-3次。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，洗滌液中氯化鈉濃度為0.16-0.18mol/L。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，洗滌次數(shù)為2次。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，洗脫液中氯化鈉的濃度≥0.5mol/L，枸櫞酸鈉的濃度為0.02-0.03mol/L；洗脫次數(shù)為2-4次。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，洗脫次數(shù)為3次。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（4）中：超濾使用的緩沖液中氯化鈉的濃度≥0.3mol/L；超濾過(guò)程溫度≤25℃。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述步驟（4）中：超濾過(guò)程溫度為2-15℃。

16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（5）中：保存的溫度為0-15℃。