[發明專利]一種小分子肝肽的提取方法

在審

• 申請號: 201811589086.0
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109371089A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 盧光明;張曉東;楊廣;楊子豐
• 申請（專利權）人: 河北肽都生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 趙寶琴

本發明提供一種小分子肝肽的提取方法，包括以下步驟：步驟一、將動物肝臟攪碎，加入純化水，攪拌均勻，升溫至54～58℃，加入脂肪酶和中性蛋白酶，攪拌酶解25?35min，得第一酶解液；步驟二、向所述第一酶解液中加入風味蛋白酶、雞腸消化道蛋白酶和酶激活劑，攪拌均勻，降溫至15～20℃，酶解提取2～3次，每次酶解時間為1～1.5h，合并各次提取液，得第二酶解液；步驟三、將所述第二酶解液加熱升溫進行酶滅活，分離純化，濃縮，凍干，得小分子肝肽凍干粉。本發明制備的肝肽產品的純度高，肽分子量為180～500道爾頓的肽含量可達到99％以上，可廣泛應用于食品、保健品、藥品等領域。

技術領域

本發明涉及生物肽分離技術領域，尤其涉及一種小分子肝肽的提取方法。

背景技術

肝臟是動物身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用。牛肝、豬肝、雞肝等動物肝臟含有豐富的蛋白質、糖類、礦物質和維生素等營養物質。肝臟多肽可以作為一種良好的醫藥化工原料和功能性食品，據報道，肝臟多肽具有天然的生物活性，能夠提高機體的免疫力，還具有抗氧化，促進凝血以及抑制腫瘤生長等功能。

小分子肽是多肽的一種分類，分子量段一般在1000道爾頓以下，也稱作小肽、低聚肽或小分子活性肽，一般由2～6個氨基酸組成，相比于分子量較大的蛋白，其具有不需要消化、直接吸收，吸收時不需要消耗人體能量、不會增加人體胃腸功能負擔的優點，此外其還具有載體的功能，能將人體內的其它營養載在其本體上，輸送到人體的細胞、組織內，因此，受到了越來越多的關注。但是，現有的小分子多肽的提取工藝存在蛋白提取效率較低，提取的小分子肽中雜質含量較多以及產品分子量分布廣的缺陷。因此，研究一種蛋白提取效率高、小分子肽含量高的肝肽提取工藝對實現動物肝臟中多肽的綜合開發具有十分重要的意義。

發明內容

針對現有小分子肝肽提取工藝中蛋白提取效率低以及提取的小分子多肽含量較低以及產品分子量分布廣的問題，本發明提供一種小分子肝肽的提取方法。

為解決上述技術問題，本發明提供的技術方案是：

一種小分子肝肽的提取方法，包括以下步驟：

步驟一、將動物肝臟攪碎，加入純化水，攪拌均勻，升溫至54～58℃，加入脂肪酶和中性蛋白酶，攪拌酶解25-35min，得第一酶解液；

步驟二、向所述第一酶解液中加入風味蛋白酶、雞腸消化道蛋白酶和酶激活劑，攪拌均勻，降溫至15～20℃，酶解提取2～3次，每次酶解時間為1～1.5h，合并各次提取液，得第二酶解液；

步驟三、將所述第二酶解液加熱升溫進行酶滅活，分離純化，濃縮，凍干，得小分子肝肽凍干粉。

相對于現有技術，本發明提供的小分子肝肽的提取方法，首先加入脂肪酶和內切酶中性蛋白酶進行初步酶解，獲得初步酶解液，然后向初步酶解液中加入風味蛋白酶和雞腸消化道蛋白酶進行深度酶解，通過兩次酶解可對肽鏈進行更高效、更廣譜地酶剪切，得到分子量分布較為集中的小分子量的肝肽，提高小分子肝肽的提取率；本發明中加入的酶激活劑可提高風味蛋白酶和雞腸消化道蛋白酶的活性，從而達到在較低溫度下提取小分子肝肽的目的，既保證了肝臟蛋白的充分酶解，又保證了不影響小分子肝肽的生物活性；通過多次低溫提取，可進一步提高小分子肝肽的提取率。本發明提供的小分子肝肽的提取方法可操作性強，酶解得到的小分子肝肽分子量小，活性高，小分子肝肽的提取率(小分子肝肽占肝臟中總蛋白質的含量)可達到87％以上，產品中分子量在500～180的小分子肽的含量可達到99％以上。

本發明中加入的雞腸消化道蛋白酶是取自雞腸消化道的蛋白酶，由多種蛋白酶組成，雞對食物有強于一般動植物的消化吸收能力，因此可以對肝臟蛋白進行更高效的酶解，對肽鏈的多個位點進行更加高效、廣譜地酶切，經雞腸消化道蛋白酶分解的蛋白，可以產生大量、種類繁多的小分子量的多肽，提高小分子肝肽的收得率。