[發(fā)明專利]一種脾氨肽的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811588231.3
• 申請(qǐng)日: 2018-12-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109468357A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張曉東;楊廣;楊子豐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北肽都生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/06
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 石家莊國(guó)為知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 13120
• 代理人: 王朝

1.一種脾氨肽的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

步驟a、將新鮮牲畜脾臟處理成碎塊，作為原料；

步驟b、依次用脂肪酶、內(nèi)切蛋白酶、外切蛋白酶對(duì)所述原料進(jìn)行酶解；其中所述脂肪酶為微生物脂肪酶和固定化脂肪酶；

步驟c、固液分離，將所得液體進(jìn)行脫脂純化，納濾，濃縮純化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，步驟a中將牲畜脾臟處理成碎塊的方法為冷凍后粉碎。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，步驟b中所述微生物脂肪酶為霉實(shí)假單胞菌產(chǎn)脂肪酶，所述固定化脂肪酶為固定化脂肪酶TL1M。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，步驟b中所述內(nèi)切蛋白酶為中性蛋白酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，所述中性蛋白酶為棲土曲霉蛋白酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，所述外切蛋白酶為乳酸菌氨肽酶。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，步驟b中酶解的具體操作為：向所述原料中加入相當(dāng)于所述原料重量4～6倍的純化水，攪拌均勻，升溫至35～40℃，加入相當(dāng)于所述原料重量0.5～1.0％的所述霉實(shí)假單胞菌產(chǎn)脂肪酶，保持20～30min，再升溫至55～60℃，加入相當(dāng)于所述原料重量0.4～0.8％的所述固定化脂肪酶TL 1M和相當(dāng)于所述原料重量1～1.5％的所述中性蛋白酶，保持20～30min，然后加入相當(dāng)于所述原料重量0.3～0.5％的所述乳酸菌氨肽酶，保持3.0～4.0h，最后升溫至90～95℃，保持10～15min滅酶。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，在步驟c中：

所述固液分離的操作為離心后過(guò)濾，離心轉(zhuǎn)速為3400～3800r/min；和/或

所述脫脂純化在三相離心機(jī)中進(jìn)行；和/或

所述濃縮純化的操作為：將納濾后的濾液濃縮，用離子過(guò)濾器純化，用雙效濃縮器進(jìn)一步濃縮；和/或

所述納濾的具體操作為：先用孔徑為0.45～0.55nm的納濾膜過(guò)濾，濾液用孔徑為0.18～0.22nm的納濾膜脫鹽。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括將步驟c所得產(chǎn)物進(jìn)行凍干。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的脾氨肽的制備方法，其特征在于，所述凍干的程序?yàn)椋涸?45～-40℃預(yù)凍1.25～1.35h，再在-42℃～-20℃、真空度0.10～0.15mbar條件下凍干7.8～8.3h，然后在-10℃～-30℃、真空度0.15mbar～0.25mbar條件下解析凍干3h～4h，即得到脾氨肽凍干產(chǎn)品。