[發明專利]抗體人源化改造方法在審
| 申請號： | 201811587711.8 | 申請日： | 2018-12-25 |
| 公開（公告）號： | CN109628531A | 公開（公告）日： | 2019-04-16 |
| 發明（設計）人： | 高晨陽;陸曉峰;雷鳴;王卓智;李競;陳智勝 | 申請（專利權）人： | 上海藥明生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12P21/00 | 分類號： | C12P21/00 |
| 代理公司： | 上海浦一知識產權代理有限公司 31211 | 代理人： | 鄭權 |
| 地址： | 200131 上海市浦東新區自由*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 抗體人源化 氨基酸 改造 保留 替換 蛋白 特異性和親和力 降低免疫反應 糖苷酶處理 特異性識別 抗體蛋白 二硫鍵 脯氨酸 人源化 糖基化 糖苷酶 抗體 人源 去除 篩選 應用 | ||
1.一種抗體人源化改造方法，其特征在于，使用N-糖苷酶處理抗體人源化改造過程中的經純化后的IgG抗體蛋白；所述N-糖苷酶為PNGaseF酶，所述PNGaseF酶特異性識別蛋白中的序列Asn-X-Ser/Thr，去除糖基化的同時保留抗體蛋白中的二硫鍵；X代表除了脯氨酸外任意一種氨基酸。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PNGaseF酶為RapidTMPNGase F酶。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶處理的反應溫度為37～55℃。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，反應溫度為50℃。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶處理的反應時間為10～15min。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述去除糖基化是指去除暴露在抗體蛋白的CDR構象表面的N-糖苷殘基。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶處理的酶切反應體系為：5ul反應底物，2ul Rapid PNGase F Buffer(5X)，3ul的DNase&RNase Free無菌水，1ul的RapidTMPNGase F酶，共計11ul的反應體系。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PNGaseF酶處理完成之后用SDS-PAGE方法或質譜儀對酶切效果進行鑒定。
9.如權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通過使用N-糖苷酶切除鼠源抗體可變區的N-糖苷以改造鼠源抗體的生物物理性質。
10.如權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通過使用N-糖苷酶切除鼠源抗體可變區的N-糖苷以確認鼠源抗體所連接的N-糖苷是否參與與抗原的結合。
11.如權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通過使用N-糖苷酶切除鼠源抗體可變區的N-糖苷以判斷該鼠源抗體是否可以用于人源化。
12.如權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通過使用N-糖苷酶切除鼠源抗體可變區的N-糖苷以簡化人源化流程。
13.如權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述方法用于以下用途：通過使用N-糖苷酶切除已人源化的抗體可變區的N-糖苷以改造人源化后的抗體的生物物理性質。
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