[發明專利]一種化學修飾酮胺氧化酶的方法

有效

• 申請號: 201811583956.3
• 申請日: 2018-12-24
• 公開（公告）號: CN109837255B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 張伯平;蔡澤浪;鄒佳信;田金艷;陳未明;鄺燕華
• 申請（專利權）人: 深圳市安帝寶科技有限公司
• 主分類號: C12N9/06
• 分類號: C12N9/06;C12N9/96
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明針對現有酶法檢測糖化白蛋白技術方案中存在酮胺氧化酶不穩定的問題，目的在于提供一種化學修飾酮胺氧化酶的方法，使用該方法化學修飾的酮胺氧化酶可保持較高的酶活性，同時不易被蛋白酶降解。其特征在于，使用N?羧基內酸酐類化合物對酮胺氧化酶進行化學修飾，目的在于使修飾后的酮胺氧化酶難以被蛋白酶降解，用于制備穩定性好的測定人體血清糖化白蛋白的試劑盒。其中N?羧基內酸酐類化合物可以舉例為L?丙氨酸?N?羧基環內酸酐、L?酪氨酸?N?羧基酸環內酸酐和L?天冬氨酸?4?芐酯?N?羧基環內酸酐等。

技術領域

本發明屬體外診斷領域，具體的說是一種化學修飾酮胺氧化酶的方法，用于制備糖化白蛋白測量試劑盒。

背景技術

糖化白蛋白是血液中白蛋白與葡萄糖發生非酶促糖化反應所產生的產物，是一個重要的血糖水平的檢測指標，其結果能反應患者近2-3周的血糖情況。由于其反映血糖水平周期較短，糖化白蛋白在治療效果的確認以及臨床用藥量的調整方面比血糖檢測“金標準”糖化血紅蛋白具有優勢，而且幾乎不受測量時血糖濃度的影響，是糖尿病病人血糖控制的良好指標。另外，與其他血糖指標相比，在患者具有一些特殊疾病或病理狀態下（如缺鐵性貧血、終末期腎病透析患者、脾切除、妊娠期婦女等），糖化白蛋白能更真實反應患者的實際血糖水平，能更及時地反映血糖的變化，從而輔助臨床醫生有效地評估療效、調整治療。

目前，臨床上糖化白蛋白檢測的常規方法主要為酮胺氧化酶法，其檢測原理如下：首先使用蛋白酶將血清中的白蛋白降解為氨基酸碎片；然后使用酮胺氧化酶選擇性的將其中的果糖氨基酸氧化產生過氧化氫；最后使用Trinder’s反應測定出過氧化氫的含量，進而得到樣本中糖化白蛋白的含量。這種方法的優點是可以使用雙試劑模式在多種型號的全自動生化儀上進行大量、快速和連續的定量測量，糖化白蛋白的測定結果通常用糖化白蛋白占血清白蛋白的百分比來表示。

通常，第一試劑（R1）的主要成分為酮胺氧化酶、Trinder’s反應底物和抗干擾物質；第二試劑（R2）的主要成分為蛋白酶和Trinder’s反應底物。理想狀態下，將樣本與R1混合均勻，消除干擾物質后，加入R2使蛋白酶與糖化白蛋白反應，引發上述反應鏈。然而實際上，蛋白酶并不能高度選擇地與白蛋白發生反應，也就是說，在加入R2后，蛋白酶會使反應體系中的白蛋白與酮胺氧化酶同時降解，這樣就抑制了第二步反應進行，使測量結果不正確。所以，需要一種保護酮胺氧化酶的方法，使之不與蛋白酶反應，以確保整個測量過程的順利進行。

在開發測定人血清糖化白蛋白試劑盒的過程中，我們發現，用N-羧基內酸酐類化合物對酮胺氧化酶進行化學修飾，可在一定程度上提高酮胺氧化酶的化學穩定性，可使其在測定過程中免于被蛋白酶降解。

發明內容

在本發明提供一種化學修飾酮胺氧化酶的方法，使用該方法化學修飾的酮胺氧化酶可保持較高的酶活性，同時不易被蛋白酶降解。本發明所述的方法對制備高質量的測定人體血清糖化白蛋白含量的試劑盒有用。

本發明所述的方法的特征在于，使用N-羧基內酸酐類化合物對酮胺氧化酶進行化學修飾，目的在于使修飾后的酮胺氧化酶難以被蛋白酶降解。

所以，本發明的內容包括：

一種化學修飾酮胺氧化酶的方法，使酮氨氧化酶不易被蛋白酶降解，其特征在于，使用L-丙氨酸-N-羧基環內酸酐（CAS：2224-52-4）、L-酪氨酸-N-羧基酸環內酸酐（CAS：3415-08-5）和L-天冬氨酸-4-芐酯-N-羧基環內酸酐（CAS：13590-42-6）三種化合物的中的一種，對酮胺氧化酶進行化學修飾。

修飾方法的具體操作包括在2℃的冰水浴中進行化學反應，且L-丙氨酸-N-羧基環內酸酐、L-酪氨酸-N-羧基酸環內酸酐和L-天冬氨酸-4-芐酯-N-羧基環內酸酐與酮氨氧化酶的比例（質量比）為2:1。

附圖說明

無。

具體實施方式