[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)融合基因的試劑、試劑盒及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811575102.0
• 申請(qǐng)日: 2018-12-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109609632A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張淑麗;李富威;方楠;王建偉;伍啟熹;劉倩;劉珂弟;唐宇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京優(yōu)迅醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 韓建偉;路秀麗

本發(fā)明提供了一種檢測(cè)融合基因的試劑、試劑盒及應(yīng)用。其中，試劑包括針對(duì)如下至少一種融合基因的檢測(cè)試劑：ARIDIB?ZNF384、DDX3X?MMLLT10、KMT2A?AF17及PATZ1?JAK2。通過(guò)首次發(fā)現(xiàn)的四個(gè)融合基因與白血病之間的關(guān)聯(lián)性，因而基于這四個(gè)融合基因中的任意一個(gè)或多個(gè)而設(shè)計(jì)的相關(guān)檢測(cè)試劑，不僅能用于檢測(cè)相應(yīng)融合基因的表達(dá)量，而且能夠用于監(jiān)測(cè)白血病患者中對(duì)應(yīng)融合基因的表達(dá)量變化情況，從而能對(duì)相應(yīng)的病情進(jìn)行監(jiān)測(cè)。而且在上述融合基因的基礎(chǔ)上，根據(jù)實(shí)際監(jiān)測(cè)需要，還可以與現(xiàn)有報(bào)道過(guò)的白血病相關(guān)標(biāo)記基因共同使用，從而相對(duì)全面地預(yù)測(cè)白血病的病情進(jìn)展?fàn)顩r或復(fù)發(fā)可能性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種檢測(cè)融合基因的試劑、試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著急性白血病化療方案的改善和造血干細(xì)胞移植的進(jìn)展，急性白血病的完全緩解(CR)率明顯提高。然而仍有許多CR患者在數(shù)年內(nèi)復(fù)發(fā)，其主要原因是血液學(xué)CR后體內(nèi)仍殘留10⁶～10⁹個(gè)白血病細(xì)胞，稱(chēng)為微小殘留病(MRD)。有學(xué)者認(rèn)為MRD是血液學(xué)CR乃至持續(xù)完全緩解(CRR)期間白血病復(fù)發(fā)的根源。如何早期準(zhǔn)確地診斷MRD，是防治急性白血病復(fù)發(fā)的前提。

現(xiàn)有資料表明，以融合基因?yàn)榘谢虻腗RD檢測(cè)與無(wú)病存活期之間存在較高的相關(guān)性，有重要的臨床應(yīng)用前景。一是在血液學(xué)復(fù)發(fā)前早期提供用于提示復(fù)發(fā)傾向的分子診斷依據(jù)，對(duì)MRD持續(xù)陽(yáng)性的患者給予早期治療可能避免或推遲復(fù)發(fā)，延長(zhǎng)無(wú)病存活期。二是在體外凈化過(guò)程中有潛在的應(yīng)用價(jià)值。凈化后的移植物中殘留的微量白血病細(xì)胞是自體骨髓移植后復(fù)發(fā)率較高的主要原因，用分子學(xué)方法控制凈化程度可能降低復(fù)發(fā)率。

檢測(cè)白血病MRD的靶標(biāo)志之一---融合基因，是由于染色體結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致的分子水平的異常，目前已發(fā)現(xiàn)超過(guò)50種與白血病有關(guān)的融合基因異常，這些異常已成為不同類(lèi)型白血病的分子生物學(xué)特異性標(biāo)志，可作為臨床上對(duì)白血病進(jìn)行分型、預(yù)后判斷和殘留病追蹤的依據(jù)。

目前用于檢測(cè)MRD的方法主要有核型分析、熒光原位雜交(fluorescence in situhybridization，F(xiàn)ISH)、流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)、聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechain reaction，PCR)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法((fluorescent quantitative PCR，qPCR)等。

其中qPCR是在PCR基礎(chǔ)上發(fā)展的核酸分子定量技術(shù)，該技術(shù)以Ig/TCR重排、染色體易位斷裂融合區(qū)為標(biāo)志，結(jié)合探針和引物的合理搭配，利用熒光信號(hào)的變化，實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過(guò)循環(huán)閾值(cycle threshold,Ct)和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析，具有敏感度高、準(zhǔn)確定量、簡(jiǎn)便快速，污染較少等優(yōu)點(diǎn)，是目前最為理想的MRD定量檢測(cè)方法。

由歐洲10個(gè)國(guó)家26個(gè)實(shí)驗(yàn)室共同參與研究制定的“歐洲防癌計(jì)劃”(EuropeAgainst Cancer program，EAC)，通過(guò)以實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)9種主要的白血病特異融合基因，建立了一套標(biāo)準(zhǔn)化的MRD定量檢測(cè)方法，并初步評(píng)價(jià)該方法的敏感度、特異性和重復(fù)性，為大規(guī)模的臨床實(shí)驗(yàn)研究建立了方法學(xué)基礎(chǔ)。也有利用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)對(duì)BCR-ABL融合基因表達(dá)量進(jìn)行定量檢測(cè)的報(bào)道。

綜合可知，盡管已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了諸多與白血病相關(guān)的融合基因，但對(duì)這些融合基因的檢測(cè)仍難以全面預(yù)測(cè)白血病的復(fù)發(fā)，因此，如何尋找并檢測(cè)新的融合基因便成為一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的在于提供一種檢測(cè)融合基因的試劑、試劑盒及應(yīng)用，以相對(duì)全面地預(yù)測(cè)白血病的復(fù)發(fā)可能性。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種檢測(cè)融合基因的試劑，該試劑包括針對(duì)如下至少一種融合基因的檢測(cè)試劑：ARIDIB-ZNF384、DDX3X-MMLLT10、KMT2A-AF17及PATZ1-JAK2。