[發(fā)明專(zhuān)利]一種牡蠣多糖及其提取方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811570887.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109554417B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石清東;王姣;王正元
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京頤方生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P19/16
• 分類(lèi)號(hào): C12P19/16;C12P19/04;C08B37/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種牡蠣多糖的提取方法，其特征在于，將牡蠣肉進(jìn)行酶解反應(yīng)時(shí)，使用的酶為枯草桿菌蛋白酶、米曲霉蛋白酶和異淀粉酶；其中，所述枯草桿菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量比為（1-2）：（1-2），所述枯草桿菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶的用量是所述牡蠣肉的2-10%；

所述酶解反應(yīng)包括第一酶解反應(yīng)和第二酶解反應(yīng)；先以所述枯草桿菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶進(jìn)行所述第一酶解反應(yīng)，再以所述異淀粉酶進(jìn)行所述第二酶解反應(yīng)；所述異淀粉酶的用量是所述牡蠣肉的0.5-2%。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述異淀粉酶與所述枯草桿菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶總量的用量比為（0.5-2）：（2-10）。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述異淀粉酶與所述枯草桿菌蛋白酶的用量比為（0.5-2）：（1-5）；

和/或，

所述異淀粉酶與所述米曲霉蛋白酶的用量比為（0.5-2）：（1-5）。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的提取方法，其特征在于，所述異淀粉酶的用量是所述牡蠣肉的0.8%-1.5%。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的提取方法，其特征在于，所述第一酶解反應(yīng)中，將牡蠣肉勻漿調(diào)節(jié)pH值6-8，在30-50℃下，以所述枯草桿菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶解1-4小時(shí)后，升溫80-90℃，保持5-10分鐘后，降溫至20-40℃，離心取清液，再進(jìn)行所述第二酶解反應(yīng)；和/或，所述第二酶解反應(yīng)中，需調(diào)整清液pH值至6.5-7.0，酶解溫度為30-50℃，酶解反應(yīng)2-6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后煮沸10-15分鐘，冷卻至室溫后即可。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述第一酶解反應(yīng)中，將牡蠣肉勻漿調(diào)節(jié)pH值6-8，在30-50℃下，以所述枯草桿菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶解1-4小時(shí)后，升溫80-90℃，保持5-10分鐘后，降溫至20-40℃，離心取清液，再進(jìn)行所述第二酶解反應(yīng)；和/或，所述第二酶解反應(yīng)中，需調(diào)整清液pH值至6.5-7.0，酶解溫度為30-50℃，酶解反應(yīng)2-6小時(shí)，酶解反應(yīng)結(jié)束后煮沸10-15分鐘，冷卻至室溫后即可。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的提取方法，其特征在于，還包括在所述酶解反應(yīng)之后，進(jìn)行去蛋白的步驟；將經(jīng)過(guò)酶解反應(yīng)的清液以截留分子量為1×10⁴Da-6×10⁴Da的膜分離，得到截留物溶液，再將所述截留物溶液按1：（4-6）的體積加入氯仿-正丁醇溶液，混合攪拌20-30 分鐘，充分靜止分層除去白色沉淀，數(shù)次后直至界面無(wú)白色沉淀即得；或，將經(jīng)過(guò)酶解反應(yīng)的清液以截留分子量為1×10⁴Da-6×10⁴Da的膜分離，得到截留物溶液，向所述截留物溶液加入占所述截留物溶液體積比為3-5%的三氯乙酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的提取方法，其特征在于，在所述去蛋白的步驟之后，還包括純化；所述純化包括：將已去蛋白的截留物溶解于蒸餾水中，加入處理好的ME-1樹(shù)脂中，吸附過(guò)夜，裝柱；分別以水、5%乙醇及15%乙醇依次洗脫，至洗脫液中不含糖，收集15%乙醇洗脫組分，收集凍干，得牡蠣多糖。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的提取方法，其特征在于，

將牡蠣肉加水勻漿；調(diào)節(jié)勻漿液pH值至6-7，加入枯草桿菌蛋白酶和米曲霉蛋白酶酶解，升溫至80-90℃，保持5-10分鐘后，降溫至20-25℃；

將異淀粉酶加入到清液中，調(diào)整清液pH值至6.5-7.0，酶解溫度為40-45℃，酶解反應(yīng)后煮沸，冷卻至室溫，離心，取清液；

用截留分子量為1×10⁴Da-6×10⁴Da的膜分離清液，得到截留物；

在截留物溶液中按1：（4-6）加入氯仿-正丁醇溶液，靜止分層除去白色沉淀，重復(fù)至無(wú)白色沉淀，將經(jīng)過(guò)除蛋白截留物溶液的真空濃縮、冷凍干燥，得截留物粉末；

將截留物粉末溶解于蒸餾水中，加入ME-1樹(shù)脂中，吸附過(guò)夜，裝柱；分別以水、5%乙醇及15%乙醇洗脫，至洗脫液中不含糖，收集15%乙醇洗脫組分，收集凍干，得牡蠣多糖。