[發明專利]一種基于酶誘導磷酸根離子激活的近紅外熒光免疫分析試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201811565498.0
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN111351924B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 劉?;陳學元;柯建熙;盧珊;黃萍;周山勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院福建物質結構研究所
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 劉元霞

1.一種基于酶誘導磷酸根離子激活的近紅外染料熒光免疫分析試劑盒，其特征在于：包括酶標板、捕獲抗體或抗原、封閉液、磷酸酶標記抗體、磷酸酶底物、稀土離子溶液和近紅外染料；所述捕獲抗體或抗原以及磷酸酶標記抗體和待測樣品中的標志物特異性結合；所述磷酸酶標記抗體為堿性磷酸酶標記二抗；所述磷酸酶底物為AMP、ADP、ATP、GMP、GDP、GTP、UMP、UDP、UTP、dTMP、pNPP、PPi中的一種或兩種以上；所述近紅外染料帶有配位官能團，所述配位官能團選自羧基、羥基、氨基、磺酸基、氰基、疊氮配位官能團中的一種或兩種以上，與稀土離子發生配位而造成近紅外發光強度的變化，所述近紅外染料為菁染料類、BODIPY類、羅丹明類、方酸類或卟啉類化合物中的一種或兩種以上；所述稀土離子選自鑭、鈰、鐠、釹、钷、釤、銪、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿、镥、釔和鈧中的一種或兩種以上。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括清洗緩沖液和樣本稀釋液，所述清洗緩沖液或樣本稀釋液獨立的選自碳酸鹽緩沖液、PBS緩沖液、PBST緩沖液、Tris-HCl緩沖液。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述磷酸酶標記抗體由戊二醛交聯法將磷酸酶與抗體進行交聯形成。

4.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述捕獲抗體或抗原、待測樣品的標志物抗原或抗體以及磷酸酶標記抗體依次形成夾心復合物。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述待測樣品為離體血清、唾液或其他指標標志物樣品。

6.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述封閉液選用BSA、酪蛋白、脫脂奶粉、蔗糖、葡聚糖、PEG、明膠或非離子表面活性劑作為封閉劑加入緩沖液進行配制。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述封閉液中封閉劑的質量濃度為1-10%。

8.如權利要求1-7任一項所述試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）包被：將捕獲抗體或抗原固定在酶標板上；

（2）封閉：加入封閉液封閉；

（3）加樣：加入含有待測樣品的溶液；

（4）制備免疫復合物：加入磷酸酶標記抗體，形成免疫復合物；

（5）酶誘導近紅外熒光反應：在酶標板中依次加入含有磷酸酶底物和稀土離子的混合溶液，進行酶催化反應；

（6）檢測：將酶催化反應后的溶液與近紅外染料混勻，檢測近紅外熒光信號。

9.根據權利要求8所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟（1）為用樣品稀釋液將與待測標志物對應的捕獲抗體或抗原稀釋后加入在酶標板中，4 ℃孵育過夜，棄去孔內液體，用清洗緩沖液洗滌。

10.根據權利要求8所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟（1）捕獲抗體或抗原的固定方式為物理吸附或共價偶聯。

11.根據權利要求8所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟（2）為封閉液加入步驟1）的酶標板中，37 ℃孵育，去孔內液體，用清洗緩沖液洗滌。

12.根據權利要求8所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟（3）為用樣品稀釋液配制待測樣品的溶液，加入步驟（2）的酶標板中，37 ℃孵育，棄去孔內液體，用清洗緩沖液洗滌。

13.根據權利要求8所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟（4）為加堿性磷酸酶標記抗體：用樣品稀釋液配制堿性磷酸酶標記抗體，加入步驟3）的酶標板中，37 ℃孵育，棄去孔內液體，用清洗緩沖液洗滌。