[發(fā)明專利]抗CD19抗體的單克隆抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811565418.1
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN111349161B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 答亮
• 申請（專利權(quán)）人: 上海星灣生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;G01N33/569
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;王正君

本發(fā)明提供了一種抗CD19抗體的單克隆抗體及其應(yīng)用。該針對CD19抗體的單克隆抗體，特異性高，親和力強(qiáng)。本發(fā)明還提供了一種對CAR?T細(xì)胞的檢測靈敏度高、準(zhǔn)確性好且特異性好的檢測試劑，基于本發(fā)明檢測試劑的檢測方法，不僅可直接針對CAR?T細(xì)胞上的胞外抗原結(jié)合區(qū)，而且檢測靈敏度遠(yuǎn)高于目前現(xiàn)有的各類檢測試劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種抗CD19抗體的單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著腫瘤免疫治療的發(fā)展，結(jié)合了抗體和免疫細(xì)胞優(yōu)勢的嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)-T細(xì)胞免疫治療受到極大關(guān)注。CAR主要由細(xì)胞膜外抗原結(jié)合區(qū)和細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)通過鉸鏈區(qū)及跨膜區(qū)構(gòu)成。膜外抗原結(jié)合區(qū)具有特異性識別并結(jié)合靶細(xì)胞表面抗原的功能，其構(gòu)成源于單克隆抗體的單鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域(SingleChain Variable Fragment，scFv)，由重鏈可變區(qū)(V_H)和輕鏈可變區(qū)(V_L)組成。細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)主要由共刺激信號和T細(xì)胞受體(TCR)的CD3zeta鏈組成。表達(dá)CAR的T(CAR-T)細(xì)胞通過scFv與靶細(xì)胞抗原結(jié)合后，胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)將信號傳入T細(xì)胞，從而激活T細(xì)胞，分泌穿孔素、顆粒酶及細(xì)胞因子等，發(fā)揮殺傷作用。目前FDA批準(zhǔn)上市了兩款CAR-T細(xì)胞藥物，分別是諾華制藥(Novartis)的Kymriah，和吉利德公司(Gilead)的Yescarta。兩款藥物均針對CD19陽性B細(xì)胞腫瘤，采用了相同的抗原結(jié)合區(qū)，即來源于鼠單克隆抗體FMC63的scFv。

構(gòu)建CAR-T細(xì)胞需要將CAR基因通過病毒或非病毒系統(tǒng)轉(zhuǎn)染并整合到T細(xì)胞基因組上。當(dāng)該基因正常表達(dá)，在細(xì)胞膜上形成跨膜的CAR結(jié)構(gòu)時，CAR-T細(xì)胞才具有識別和殺傷靶細(xì)胞的活性。因此，準(zhǔn)確檢測表達(dá)CAR的陽性T細(xì)胞是CAR-T藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵步驟，也是臨床病人治療劑量控制、過程監(jiān)控及輔助診斷的重要環(huán)節(jié)。常見的檢測方法有兩種類型：檢測CAR基因陽性T細(xì)胞和檢測CAR蛋白陽性T細(xì)胞。

檢測CAR基因陽性T細(xì)胞：定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)(Quantitative Real Time PCR,qPCR)是檢測CAR基因陽性T細(xì)胞的主要方法。通過qPCR可以檢測細(xì)胞基因組上整合的CAR基因，以及CAR基因的拷貝數(shù)。但該方法不能準(zhǔn)確反映表達(dá)CAR的陽性T細(xì)胞，因為有一部分整合了CAR基因的T細(xì)胞沒有正常表達(dá)CAR(Jennifer N.Brudno,et al.,Journal ofClinical Oncology,2016)，這些T細(xì)胞帶來的假陽性降低了qPCR方法應(yīng)用的準(zhǔn)確性。更為嚴(yán)重的是，qPCR方法無法分辨CAR陽性T細(xì)胞和CAR陽性B細(xì)胞，從而難以發(fā)現(xiàn)CAR陽性B細(xì)胞引發(fā)的治療和復(fù)發(fā)風(fēng)險(Marco Ruella,et al.,Nature Medicine,2018)。此外，qPCR方法無法滿足對T細(xì)胞多種表面標(biāo)志物(CD3、CD4、CD8等等)同時檢測的需求，這進(jìn)一步限制了qPCR方法的應(yīng)用。