[發明專利]一種高效制備甘草次酸的重組酶及方法

有效

• 申請號: 201811564903.7
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN109628427B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 李春;馮旭東;呂波
• 申請（專利權）人: 北京理工大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N15/81;C12N1/21;C12N1/19;C12P33/00;C12R1/19;C12R1/84
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

1.一種制備甘草次酸的重組酶，其特征在于，包括來源于土曲霉的β-葡萄糖醛酸苷酶AtGUS的TIM桶結構域、及來源于米曲霉的β-葡萄糖醛酸苷酶PGUS的糖基結構域SBD和免疫球蛋白狀β-三明治結構域IMD，所述重組酶為AtGUS-mix，其氨基酸序列如Seq ID NO. 1所示。

2.根據權利要求1所 述的重組酶，其特征在于，所述PGUS的糖基結構域SBD、免疫球蛋白狀β-三明治結構域IMD，與AtGUS的TIM桶結構域按下述順序連接組合：PGUS的糖基結構域SBD—PGUS的免疫球蛋白狀β-三明治結構域IMD—AtGUS的TIM桶結構域。

3.根據權利要求1或2所述的重組酶，其特征在于，所述重組酶為AtGUS-mix，其氨基酸序列如Seq ID NO. 1所示；所述AtGUS-mix的基因的核苷酸序列如Seq ID NO.2所示。

4.一種制備甘草次酸的重組載體，其特征在于，包括權利要求1-3任一所述的重組酶的基因序列。

5.根據權利要求4所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體為表達載體上連接有如Seq ID NO.2所示的核苷酸序列。

6.根據權利要求5所述的重組載體，其特征在于，所述表達載體選自原核表達載體或真核表達載體。

7.根據權利要求5所述的重組載體，其特征在于，所述表達載體為真核表達載體；所述表達載體選自：pET28a載體、pGAPZα載體。

8.一種制備甘草次酸的轉化體，其特征在于，其宿主細胞內包括：權利要求1-3任一所述的重組酶的基因序列；和/或，權利要求4或5所述的重組載體。

9.根據權利要求8所述的轉化體，其特征在于，所述宿主細胞選自：大腸桿菌DH5α、或Top10或BL21（DE3）或畢赤酵母GS115。

10.一種制備甘草次酸的重組酶的制備方法，其特征在于，包括：將AtGUS的TIM桶結構域組裝于PGUS的結構底盤上；所述結構底盤包括PGUS的糖基結構域SBD和免疫球蛋白狀β-三明治結構域IMD；所述重組酶為AtGUS-mix，其氨基酸序列如Seq ID NO. 1所示。

11.根據權利要求10所述的重組酶的制備方法，其特征在于，還包括：將PGUS的糖基結構域SBD和免疫球蛋白狀β-三明治結構域IMD、以及AtGUS的TIM桶結構域按下述結構順序進行依次有序組裝：PGUS的糖基結構域SBD—PGUS的免疫球蛋白狀β-三明治結構域IMD—AtGUS的TIM桶結構域。

12.根據權利要求10或11所述的重組酶的制備方法，其特征在于，還包括：將如Seq IDNO.2所示的基因序列與表達載體連接得到重組載體。

13.根據權利要求12所述的重組酶的制備方法，其特征在于，所述制備方法進一步包括：將所述重組載體轉化至宿主細胞獲得轉化體。

14.根據權利要求13所述的重組酶的制備方法，其特征在于，所述制備方法進一步包括：擴繁所述轉化體，表達所述重組酶。

15.根據權利要求14所述的重組酶的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括：對所述重組酶進行純化。

16.一種制備甘草次酸的酶制劑，其特征在于，包括權利要求1-3任一所述的重組酶。

17.根據權利要求16所述的酶制劑，其特征在于，還包括輔料；所述輔料為酶制劑常用輔料。