[發明專利]通過組織培養獲得梔子苷的方法

有效

• 申請號: 201811563779.2
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN109644869B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發明（設計）人: 陳建榮;劉芳;趙晨曦;唐偉卓;唐映紅
• 申請（專利權）人: 長沙學院
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00;A01H1/08
• 代理公司: 北京世譽鑫誠專利代理有限公司 11368
• 代理人: 孫國棟

1.通過細胞培養獲得梔子苷的方法，包括如下步驟：

A. 梔子坐果期，當梔子果實的直徑為2-3mm時，用濃度為0.6-1.2%的秋水仙素溶液處理梔子果，處理時長24-36小時，處理結束后，用清水對存活的果實進行噴霧淋洗；

B. 采摘未成熟的新鮮梔子果實撥開取其種子并消毒，通過無菌操作將消毒處理的種子撥去種皮，并用解剖刀將脫皮的梔子仁按橫切面切成兩半，接種在脫分化培養基上，25℃室溫下培養7-10天，獲得種仁愈傷組織；

C. 多倍體細胞系接種在MS固體培養基中，繼代培養三次以上，每次繼代培養的時間為7-10天；

D. 得到的多倍體細胞接種在合成培養基中，25℃室溫下培養10-20天，得到富集梔子苷次生代謝產物的細胞；

這里用A-D表示這些步驟的先后次序；

步驟B脫分化培養基是在MS培養基中添加0.5mg/L的2, 4-D、0.25mg/L 6-BA、1.0-3.0mg/L的輔酶A、30-40mg/L的蔗糖得到的培養基；

步驟C中繼代培養用的培養基為在MS培養基的基礎上添加1.0-3.0mg/L的NAA和2.0-4.0mg/L 6-BA得到的培養基；

步驟D合成培養所用的培養基在MS液體培養基中添加苯丙氨酸400mg/L、酪氨酸350mg/L、5-氮雜胞苷30-60μM、蔗糖30-60g/L，pH調整到5.5-6.5。

2.根據權利要求1所述的通過細胞培養獲得梔子苷的方法，其特征在于，其中步驟A還可以為：對開花期的梔子進行誘導，具體做法是每天用濃度為0.6-1.2%的秋水仙素噴灑花芽，持續時間為3-9天。

3.根據權利要求1或者權利要求2所述的通過細胞培養獲得梔子苷的方法，其特征在于，所述步驟A中秋水仙素溶液中含有2- 6mg/L TDZ。