[發明專利]功能化Fe3

有效

• 申請號: 201811563356.0
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN109632910B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 聶華貴;王宇;楊植;侯俊婕;孔素珍;詹迎新;鄭仙諾;丁欣慰;黃少銘
• 申請（專利權）人: 溫州大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/26;G01N27/12;B82Y5/00;B82Y15/00;B82Y30/00
• 代理公司: 溫州名創知識產權代理有限公司 33258
• 代理人: 陳加利

1.一種基于功能化Fe₃O₄/ Au納米復合材料的檢測真菌毒素的電化學傳感器，其特征在于：

所述功能化Fe₃O₄/ Au納米復合材料的制備方法，包括以下步驟：

（1）1 mL Fe₃O₄磁珠用0.05% Tween PH 8.5氨水溶液磁吸洗滌5次進行活化，加入36 mL0.05% Tween PH 8.5氨水和1.4 mL 1wt% HAuCl₄ ，溶液置于反應容器中，置于搖床過夜；

（2）磁吸去除上清液，用0.05% Tween PH 8.5氨水洗滌兩次，然后加39 mL 0.05%Tween PH 8.5氨水和1.4 mL 20 mM NH₂OH·HCl，搖床反應10 h，磁吸除去上清液，用1 mg/mL聚乙烯吡咯烷酮洗滌兩次除去溶液中的金納米顆粒，用氨水洗滌2次后，得到第一反應液；

（3）上述第一反應液磁吸后加入37 mL 0.05% Tween PH 8.5氨水，然后加入29 μL 1%HAuCl₄ 和425 μL 20 mM NH₂ OH·HCl，用1 mg/mL 聚乙烯吡咯烷酮、0.05% Tween PH 8.5氨水分別洗滌兩次，磁吸去除上清液，本步驟操作重復幾次，在Au種子上分別進行1-4次覆蓋，得到Fe₃O₄/ Au納米復合材料，最后，將Fe₃O₄/ Au納米復合材料分散在10 mL 0.5%且含1%檸檬酸三鈉的聚乙烯吡咯烷酮溶液；

將捕獲探針修飾在所述的Fe₃O₄/Au納米復合材料表面，獲得真菌毒素檢測傳感器，所述的捕獲探針的核苷酸序列5′→3′為SH-TGTCCGATGCAAA；

具體修飾方法包括：加入定量的標記捕獲探針的Fe₃O₄/Au納米復合材料和OTA適配體鏈、適量的核酸外切酶Exno Ⅰ的緩沖溶液、適宜的滅菌水，置于90 ℃水浴5 min，然后置于55 ℃水浴雜交2 h，加入Exno Ⅰ和不同濃度的OTA，置于37 ℃水浴1.5 h，然后加入適量的乙二胺四乙酸EDTA，反應15 min，磁吸去除上清液，用PBS洗滌；加入適量的滅菌水， TdT轉移酶緩沖液、TdT轉移酶、 dTTP置于37 ℃溫育2 h，加入8 μL 100 mM EDTA反應15 min使TdT轉移酶滅活；最后用滅菌水洗滌5次，加入45 μL滅菌水；將得到的第二反應液混勻，在間隙陣列電極下方放置一塊磁鐵，在磁場的作用下，將上述第二反應液滴涂5μL在電極表面，制得檢測真菌毒素的電化學傳感器。

2.一種如權利要求1所述的檢測真菌毒素的電化學傳感器在線性檢測食品中的OTA毒素的應用。