[發明專利]一種檢測N-乙酰轉移酶2熒光探針的應用

有效

• 申請號: 201811562738.1
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN109575914B
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 馬驍馳;馮磊;崔京南;田象閣;田鎮豪;寧靜;王超;霍曉奎;于振龍;孫成鵬
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學
• 主分類號: C12Q1/00
• 分類號: C12Q1/00;C09K11/06;C07D311/82;G01N21/64
• 代理公司: 大連星海專利事務所有限公司 21208
• 代理人: 楊翠翠

一種檢測N?乙酰轉移酶2熒光探針的應用，其屬于生物醫藥技術領域。它可用于測定不同來源生物體系中N?乙酰轉移酶2的酶活性。以ARHB作為特異性探針反應底物，借助N?乙酰轉移酶2體外反應體系，通過定量檢測單位時間內N?乙?；x產物的生成量來測定各生物樣品中N?乙酰轉移酶2的活性。本發明可用于不同個體來源人和動物組織樣本、不同種屬細胞及細胞制備物、以及各種植物和微生物中N?乙酰轉移酶2活性的定性、定量測定，并可實現對N?乙酰轉移酶2處置藥物能力的評估，以及N?乙酰轉移酶2抑制劑的開發、篩選。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種檢測N-乙酰轉移酶2熒光探針的應用。

背景技術

芳香胺N-乙?；D移酶為Ⅱ相藥物代謝酶，主要的生理功能為能夠將乙酰輔酶A上的乙?；D移到芳香胺類、肼、芳香羥胺和芳香肼等物質的N原子或O原子上，在人體內對芳香胺類致癌物質的活化或滅活以及某些藥物的代謝過程中起著重要的作用。這主要是因為乙?；饔檬窃擃愇镔|代謝轉化的重要步驟之一，由NATs催化完成。發生在氮原子上的乙?；饔盟a生的胺類衍生物通常是無毒性的，而發生在氧原子上的乙酰化作用所產生的乙酰氧基芳胺類或雜環胺類衍生物含有高反應活性的氮離子，極易與DNA結合形成加合物，引起DNA突變，從而導致細胞癌變。

人類NAT具有兩種亞型 NAT1 NAT2，兩者有相互獨立的基因編碼。雖然兩者在結構上有一定相似性，但在組織分布和生物學作用方面相差較大。 NAT1 表達于人體大多數組織，催化對氨基水楊酸和對氨基苯甲酸等物質的乙酰化代謝。NAT2又稱芳香胺N乙?；D移酶，主要催化芳香胺進行乙?；D移反應;NAT2 表達于肝臟和腸道，在體內參與20多種肼類化合物及致癌性芳香胺和雜環胺 類化合物的生物激活或滅活代謝。NAT1、NAT2均具有遺傳多態性，但因 NAT2的顯著多態性在藥 物代謝及環境致癌物激活和失活過程中表現出更為 重要的意義，因此，近年來NAT2在藥物代謝方面的作用正受到越來越多的重視。早在幾十年前，人們就發現機體中NAT2功能的變異與異煙肼乙?；饔玫亩鄻有允窍嚓P的。NAT2活性在人群中呈多態分布，根據乙?；硇偷牟煌蓪⑷巳簞澐譃槿?慢型乙酰化代謝者、快型乙?；x者和中間型乙?；x者。NAT2)在肝臟中參與包括異煙肼 、利福平在內的一線抗結核藥物的代謝。異煙肼通過NAT2的乙?；饔蒙梢阴．悷熾?，后者水解為異煙酸和 乙酰肼，乙酰肼一部分進一步水解為肼，一部分在NAT2酶的作用下生成無毒物質排出體外，肼及乙酰肼已被認定是肝毒性物質，可以導致藥物性肝損害的發生。利福平具有誘導肝臟多種代謝酶的作用，利福平不僅在肝中去乙?；癁楫悷熾乱阴；峁┮阴；?，且可誘導肝藥酶活性，加速乙酰異煙肼代謝為乙酰肼，從而增加異煙肼的肝毒性。

因此，開發具有高靈敏度、抗環境干擾能力強的適用于檢測N-乙酰轉移酶2的特異性熒光探針底物，并建立高靈敏度的科學檢測方法，在臨床診斷、藥物開發與合理使用方面，具有重要的應用價值。

發明內容

本發明提供一種檢測N-乙酰轉移酶2熒光探針的應用，該特異性熒光探針底物可被N-乙酰轉移酶2選擇性的水解，生成熒光屬性明顯改變的水解產物，可被熒光檢測器檢測。利用該探針反應可對多種生物體系中N-乙酰轉移酶2的分布和功能進行定量評價，并可用于N-乙酰轉移酶2抑制劑的篩選。

本發明公開的N-乙酰轉移酶2的特異性熒光探針底物，為該探針底物為9-(4-氨基苯基)-3,6-雙(二乙氨基)占噸翁醋酸鹽（ARHB）。

本發明還公開了上述化合物作為N-乙酰轉移酶2的特異性熒光探針底物的應用：采用上述ARHB作為N-乙酰轉移酶2的特異性底物，進行結合反應，通過檢測單位時間內代謝產物的生成量（代謝產物熒光強度）來定量測定不同生物體系（包括重組表達N-乙酰轉移酶2、人或動物組織制備液、各類組織細胞、微生物及植物等生物體系）中N-乙酰轉移酶2的活性；具體反應條件如下：

——體系中以ARHB作為特異性探針底物；底物濃度選擇10 μM。