[發(fā)明專利]狂犬病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811560784.8
• 申請(qǐng)日: 2018-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN109439803A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖北金雀醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于特異性檢測(cè)樣品中狂犬病毒的試劑盒，其中包括PCR反應(yīng)液、酶混合液、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品，PCR反應(yīng)液中用于核酸擴(kuò)增反應(yīng)的引物序列如下：

P1：5`-CTGGCAGAYGAYGGAAC-3`，

P2：5`-CATCATGATTCGAGTATARACAGC-3`，

PCR反應(yīng)液中用于熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)的寡核苷酸探針的序列如下：

Probe1：5`-X1-TCTGAYGACGAGGAYTACTTCTCMGG-Y1-3`，

Probe1熒光報(bào)告基團(tuán)X1為FAM，熒光淬滅基團(tuán)Y1為Eclipse。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征還在于PCR反應(yīng)體系為20 μl，包括2×PCR緩沖液10 μl、10mmol/L dNTP 1.0 μl、25μmol/L引物各0.5 μl、10μmol/L 探針0.2 μl、逆轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動(dòng)Taq酶混合液0.8μl、樣品RNA 2 μl，加滅菌水至終體系20 μl。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征還在于PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)為：

逆轉(zhuǎn)錄階段：42℃，10min；預(yù)變性階段：94℃，10sec；預(yù)擴(kuò)增階段：變性 94℃，5sec；退火 50℃，20sec；延伸 72℃，20sec；共5個(gè)循環(huán)；注意本階段不采集熒光信號(hào)；

檢測(cè)階段：變性 94℃，5sec；退火 56℃，50sec；延伸 72℃，15sec；共40個(gè)循環(huán)；在退火步驟檢測(cè)熒光信號(hào)。