[發明專利]一種針對EGFR+腫瘤的融合蛋白及其應用

在審

• 申請號: 201811559774.2
• 申請日: 2018-12-19
• 公開（公告）號: CN109734811A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發明（設計）人: 岳喜連;張傳能;張朝賓;徐圣濤;吳國祥
• 申請（專利權）人: 上?？妻乃帢I科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/85;C12N5/10;A61K38/16;A61K47/42;A61P35/00
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 俞滌炯

本發明涉及一種針對EGFR+腫瘤細胞的多功能融合蛋白，其中包括特異性識別腫瘤抗原EGFR的抗體功能區、屏蔽腫瘤免疫抑制抗原CD47信號的SIRPα胞外功能區、結合Fc受體的高親和力IgG1Fc以及用于連接功能區的非功能性氨基酸片段；本發明還涉及上述融合蛋白的制備和應用。本發明所述的重組融合蛋白既能識別EGFR陽性的腫瘤細胞，又能屏蔽CD47免疫抑制信號通路，同時高親和力的Fc部分可以增強免疫細胞對腫瘤的免疫反應，具有很好的臨床前景和廣泛的應用范圍。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種針對EGFR陽性腫瘤的融合蛋白及其在治療癌癥中的應用。

背景技術

腫瘤細胞擴散和轉移是惡性癌癥的特征(Nat.Rev.Cancer 2003，3：362–374)，其中EGF及其在腫瘤細胞上的受體EGFR過度表達是主要原因之一(J.Cell.Physiol.2008，214：559–567)。EGF/EGFR信號通路的激活可以刺激腫瘤細胞的生長，而且EGFR在大部分腫瘤細胞中高表達(Gastric Cancer 2012，15:252-64)。靶向EGFR的抗體可以促使EGFR的內吞，降低細胞生長信號，進而抑制腫瘤的生長、擴散及遷移。Cetuximab是針對EGFR的治療性單克隆抗體，可以高親和結合EGFR和EGFRvIII(Radiotherapy and Oncology 2009，92：393–398)，引起機體對腫瘤的原生免疫和次生免疫反應，臨床應用可以獲得一定的臨床效果(Cancer Immunol Immunother 2009，58:1853–64)，但是大部分患者并沒有獲得理想的臨床效果(Biologics 2007，1:77–91)，對結直腸癌的ORR只有9％(J Clin Oncol.2004，22:1201-8)。

CD47是一種多功能蛋白，與其配體共同作用可以引起細胞生長和遷移(Nat Med2015，21：1122–3)，與表達在巨噬細胞和抗原遞呈細胞表面信號調節蛋白(signalregulatory protein-α，SIRPα)的結合可以誘導免疫抑制信號，防止自體免疫的發生，阻礙巨噬細胞對CD47陽性細胞的內吞(Trends Cell Biol 2001，11：130–135；Science 2000，288：2051–2054)。外周血中紅細胞，血小板，淋巴細胞及干細胞廣泛表達CD47，這也是以上細胞避免被巨噬細胞吞噬的主要機制(J Exp Med 2001，193：855–862；Leuk Lymphoma2004，45：1319–1327；Cell 2009，138：271–285)。腫瘤產生免疫抑制的一種方式是通過CD47與其配體信號通路激活來抑制免疫系統對腫瘤的反應。越來越多的證據表明，CD47普遍在各種實體瘤細胞表面高表達(PNAS 2012，109：6662–6667)，而高表達CD47的腫瘤細胞可以逃避巨噬細胞的識別和內吞，是腫瘤逃避免疫監控，進而生長和擴散的主要機理之一(Trends Immunol 2010，31：212–219)。CD47信號通路的激活也是有些抗體藥物臨床作用不理想的原因之一(PNAS 2011，108：18342–18347)，腫瘤細胞CD47的表達量與患者生存時間成明顯負相關性(Trends Cell Biol 2001，11：130–135)?，F有證據表明，利用抗體阻斷CD47與SIRPα的相互作用可以增加巨噬細胞對腫瘤細胞的內吞，抑制腫瘤的擴散與轉移(JClin Invest 2016，126：2610–20；PLoS ONE 10(9)：e0137345)。但是，由于抗體的親和力較高，利用抗體的免疫抑制作用會造成對表達CD47正常細胞的清除，例如導致紅細胞缺少，造成極度貧血現象(eLife 2017；6：e18173)。由于SIRPα與CD47親和力較弱和機體內巨量表達CD47的細胞的存在，所以單純利用SIRPα進行屏蔽CD47的效果也不理想。