[發明專利]一種針對EGFR+腫瘤的融合蛋白及其應用

在審

• 申請號: 201811559774.2
• 申請日: 2018-12-19
• 公開（公告）號: CN109734811A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發明（設計）人: 岳喜連;張傳能;張朝賓;徐圣濤;吳國祥
• 申請（專利權）人: 上?？妻乃帢I科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/85;C12N5/10;A61K38/16;A61K47/42;A61P35/00
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 俞滌炯

1.一種針對腫瘤抗原和免疫檢查點的多功能融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括識別腫瘤抗原的抗體功能區、屏蔽腫瘤表面免疫抑制蛋白的功能區、結合免疫細胞的功能區以及用于連接各功能區的氨基酸片段。

2.根據權利要求1所述的多功能融合蛋白，其特征在于，所述識別腫瘤抗原的抗體為針對EGFR的單鏈抗體可變區；所述屏蔽CD47的融合蛋白功能區為SIRPα；所述與免疫細胞的結合區為融合蛋白的IgG1Fc片段。

3.根據權利要求2所述的多功能融合蛋白，其特征在于，所述SIRPα的氨基酸序列為SEQID NO：1所示序列；所述EGFR抗體的重鏈Fab氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示序列；所述EGFR抗體的輕鏈Fab氨基酸序列為SEQ ID NO：3所示序列；所述IgG1Fc的氨基酸序列為SEQ IDNO：4所示序列。

4.根據權利要求3所述的多功能融合蛋白，其特征在于，所述SIRPα的氨基酸序列為SEQID NO：1所示序列中的31-150位點或多個序列重復或含有類似功能突變體；所述EGFR抗體scFv的重鏈氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示序列中的1-118位點或類似功能的突變體；所述EGFR抗體scFv的輕鏈氨基酸序列為SEQ ID NO：3所示序列中的1-107類似功能的突變體；所述IgG1Fc的氨基酸序列為SEQ ID NO：4所示序列中的3-219位點或具有類似功能的突變體；所述用于連接功能區的氨基酸序列為SEQ ID NO：5所示序列或多個重復序列。

5.根據權利要求2所述的的多功能融合蛋白，其特征在于，所述多功能融合蛋白為SEQID NO：6所示氨基酸序列或基于本發明原理而產生的類似功能結構。

6.根據權利要求5所述的多功能融合蛋白，其特征在于，制備所述融合蛋白的步驟包括：

步驟1)通過人工合成的方式合成SEQ ID NO：6所示氨基酸序列相對應堿基，組成融合蛋白構造基因；

步驟2)將步驟1)所述的融合蛋白構造基因轉入哺乳動物表達載體，并轉染至倉鼠卵巢細胞進行蛋白表達；

步驟3)將步驟2)所述的倉鼠卵巢細胞放置在孵箱中培養一段時間，取上清液，通過親和層析純化后制得重組融合蛋白。

7.根據權利要求6所述的的多功能融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白構造基因的構建步驟包括：根據SIRPα、抗EGFR抗體Fab和IgG1Fc的功能區氨基酸相對應的堿基，通過基因合成的方式與非功能氨基酸片段堿基連接成多功能融合蛋白構造基因。

8.一種如權利要求1～7中任一項所述的多功能融合蛋白在制備治療表達CD47和EGFR腫瘤而引起的疾病的藥物中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述應用為多功能融合蛋白的單獨應用或與化療、靶向藥物、抗體藥物、細胞治療組成的聯合應用。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述疾病包括任何具有EGFR和CD47高表達的實體瘤。