[發明專利]一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑

在審

• 申請號: 201811554952.2
• 申請日: 2018-12-19
• 公開（公告）號: CN109682972A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 梅義武;劉興;葉佳穎
• 申請（專利權）人: 浙江卓運生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/553;G01N33/543;G01N21/65;B82Y30/00;B82Y15/00
• 代理公司: 寧波市鄞州金源通匯專利事務所(普通合伙) 33236
• 代理人: 龔丹宇

本發明公開了一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑，其采用三步法或者兩步法在金屬納米顆粒表面MNSs依次修飾拉曼信號分子4?巰基苯甲酸4?MBA、薄薄的一層還原型牛血清白蛋白rBSA、以及在rBSA層接枝靶分子葉酸FA，從而獲得復合金屬納米顆粒MNSs?MBA?rBSA?FA，最后經離心洗滌兩次，最后分散在水相中，4°C保存。本發明得到的一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑，其可確定外周血樣中是否含有乳腺癌CTCs，且SERS檢測試劑于保存條件下可以穩定6個月以上。

技術領域

本發明涉及一種癌細胞檢測，特別是一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑。

背景技術

癌癥是全球死亡率僅次于心血管疾病的重大疾病，90%以上癌癥患者的死亡都是由于腫瘤轉移。因此，腫瘤的早期診斷對于挽救患者生命至關重要。然而，惡性腫瘤在早期無明顯癥狀，發現時大多數已屬中晚期，對患者來說已經錯過最佳治療時期。傳統的臨床診斷方法很難實現有效的腫瘤早期診斷，如：磁共振成像（MRI）、電子計算機斷層掃描（CT）、正電子發射計算機斷層顯像（PET）。因此，發展一種腫瘤的早期診斷方法顯得非常重要和迫切。

循環腫瘤細胞（CTCs）是從腫瘤組織脫落進入血管的腫瘤細胞，可在血液中循環侵入其他器官，從而形成腫瘤的轉移擴散，這是導致大部分癌癥病人死亡的主要原因。CTCs的檢測可有效地應用于體外早期診斷、愈后及存活時間判斷、快速判斷治療效果、體內耐藥性檢測、個體化治療、腫瘤復發檢測等，具有重要的科學意義和臨床應用價值。

現有一種直接檢測血液中乳腺癌CTCs的具有表面增強拉曼散射（SERS）功能的試劑，該SERS試劑檢測乳腺癌CTCs的靈敏度達到了5個細胞/mL血液，且穩定性好，冷藏可穩定6個月以上。

雖然該SERS試劑檢測乳腺癌CTCs的靈敏度達到了5個癌細胞/mL血液，可用于乳腺癌的療效預測、個體化治療指導、轉移復發監測等，但不能用于乳腺癌的早期診斷，靈敏度有待進一步提高。

發明內容

本發明的目的是為了解決上述現有技術的不足而提供一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑，提高其靈敏度，同時應用于乳腺癌的早期診斷。

為了實現上述目的，本發明所設計的一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑，包括以下步驟：

1）制備金屬納米顆粒

按重量份將60-70份金、10-15份銀、10-15份鉑、1-5份石墨烯、0.5-2份鉍、0.1-0.5份鉬以及0.1-0.5份鈀溶于稀鹽酸溶液中，加熱至沸，待冷卻后，離心棄去上清液，再離心洗滌兩次，貯存在4℃冰箱中待用，利用ICP-OES測其金元素的濃度，將其濃度稀釋至0.02 mg/mL；上述金屬納米顆粒的形狀為金屬納米星，且定義為MNSs；

2）制備還原型牛血清白蛋白-葉酸復合物

將葉酸（FA）、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）加入到PBS（pH7.4，10 mM）中溶解，并在避光條件下攪拌反應8.0 h，即可得到活化的FA（FA-NHS）；接著將硼氫化鈉（NaBH₄）逐滴加入到牛血清白蛋白（BSA）中，在室溫下攪拌反應持續1.0 h，即可獲得還原型牛血清白蛋白（rBSA），然后把上述rBSA加入到FA-NHS的PBS溶液中，在室溫下，反應4.0 h即可得到rBSA-FA復合物，最后使用超濾離心管將反應后的溶液濃縮，并分散在超純水中，4 °C儲存待用；

3）制備SERS試劑