[發明專利]一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑

在審

• 申請號: 201811554952.2
• 申請日: 2018-12-19
• 公開（公告）號: CN109682972A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 梅義武;劉興;葉佳穎
• 申請（專利權）人: 浙江卓運生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/553;G01N33/543;G01N21/65;B82Y30/00;B82Y15/00
• 代理公司: 寧波市鄞州金源通匯專利事務所(普通合伙) 33236
• 代理人: 龔丹宇

1.一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑，其特征在于：包括以下步驟：

1）制備金屬納米顆粒MNSs

按重量份將60-70份金、10-15份銀、10-15份鉑、1-5份石墨烯、0.5-2份鉍、0.1-0.5份鉬以及0.1-0.5份鈀溶于稀鹽酸溶液中，加熱至沸，待冷卻后，離心棄去上清液，再離心洗滌兩次，貯存在4℃冰箱中待用，利用ICP-OES測其金元素的濃度，將其濃度稀釋至0.02 mg/mL；上述金屬納米顆粒的形狀為金屬納米星，且定義為MNSs；

2）制備還原型牛血清白蛋白-葉酸復合物rBSA-FA

將葉酸FA、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽EDC和N-羥基琥珀酰亞胺NHS加入到PBS緩沖溶液中溶解，并在避光條件下攪拌反應8.0 h，即可得到活化的葉酸FA-NHS；接著將硼氫化鈉逐滴加入到牛血清白蛋白中，在室溫下攪拌反應持續1.0 h，即可獲得還原型牛血清白蛋白，然后把上述還原型牛血清白蛋白加入到已經活化的葉酸FA-NHS的PBS緩沖溶液中，在室溫下，反應4.0 h即可得到還原型牛血清白蛋白-葉酸復合物rBSA-FA，最后使用超濾離心管將反應后的溶液濃縮，并分散在超純水中，4 °C儲存待用；

3）制備SERS試劑

采用三步法或者兩步法在金屬納米顆粒表面依次修飾拉曼信號分子4-巰基苯甲酸4-MBA、薄薄的一層還原型牛血清白蛋白rBSA、以及在還原型牛血清白蛋白層接枝靶分子葉酸FA，從而獲得復合金屬納米顆粒MNSs-MBA-rBSA-FA，最后經離心洗滌兩次，最后分散在水相中，4 °C保存，利用ICP-OES測納米粒子的金元素濃度，將其濃度稀釋至0.5 mg/mL。

2.根據權利要求1所述的一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑，其特征在于：所述復合金屬納米顆粒的三步法制備方法包括以下步驟：

（1）拉曼信號分子4-MBA的修飾

把不同濃度溶于THF的4-MBA分別加入到金屬納米顆粒MNSs中，室溫下攪拌反應2 min，即可獲得修飾有4-MBA的納米顆粒MNSs-MBA；

（2）親水性大分子rBSA的修飾

將不同濃度的rBSA水溶液分別與MNSs-MBA混合，在室溫下攪拌反應持續5.0 min，即可得到復合金屬納米顆粒MNSs-MBA-rBSA；

（3）靶分子葉酸FA的偶聯

將上述活化的葉酸FA加入到MNSs-MBA-rBSA分散液中，室溫反應4.0 h，即可獲得接枝有葉酸FA的復合納米顆粒MNSs-MBA-rBSA-FA。

3.根據權利要求1所述的一種檢測乳腺癌腫瘤循環細胞的SERS試劑，其特征在于：所述復合金屬納米顆粒的三步法制備方法包括以下步驟：

（1）拉曼信號分子4-MBA的修飾

把不同濃度溶于THF的4-MBA分別加入到金屬納米顆粒MNSs，室溫下攪拌反應2 min，即可獲得修飾有4-MBA的納米顆粒MNSs-MBA；

（2）復合物rBSA-FA的修飾

將不同濃度的rBSA-FA水溶液分別與MNSs-MBA混合，在室溫下攪拌反應持續5.0 min，即可得到表面功能化rBSA-FA的復合金屬納米顆粒MNSs-MBA-rBSA-FA。