[發明專利]一種基于RPA檢測番茄褪綠病毒的方法

在審

• 申請號: 201811552637.6
• 申請日: 2018-12-19
• 公開（公告）號: CN109371173A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 宋建;金鳳媚;薛俊
• 申請（專利權）人: 天津市農業生物技術研究中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種用于檢測番茄褪綠病毒的特異性引物，其特征在于所述的引物序列為

F4: 5’-GATTTGATAAATGAGGTTAGACCCAAAATG-3’，

R5:5’-CGTTTCTTTTCATAAGTAGGTTCGAGATAA-3’。

2.一種采用權利要求1所述的特異性引物進行番茄褪綠病毒的檢測方法，其特征在于按如下的步驟進行：

（1）總RNA 提取及cDNA 的合成：

將提取的RNA制備成cDNA，-20℃保存備用；

（2）引物設計：設計檢測番茄褪綠病毒的RPA檢測引物；

（3）檢測：

以制備的cDNA為模板，利用設計的引物進行RPA擴增，同時設置陰性對照，RPA擴增體系的配制方法如下: 向含有凍干酶粉的0.2mL TwistAmp反應管中加入再水化緩沖液29.5μL，去離子水10μL，上、下游引物各2.5μL(終濃度為0.4μmol/L)，模板cDNA3μL，最后再加入醋酸鎂溶液2.5μL，280 mmol /L；將RPA擴增體系充分混勻，置于39℃的金屬浴上反應40 min，RPA反應結束后，利用純化試劑盒對RPA擴增產物進行回收純化，取產物5μL于1.5 %瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像系統上觀察結果。

3.采用權利要求2所述的方法在用于快速有效的鑒定出感染番茄褪綠病毒的植株方面的應用。