[發(fā)明專利]一種提高磷脂酶C穩(wěn)定性的方法

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• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN111334497A
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發(fā)明（設計）人: 楊倚銘;吳清杭;趙城陽;宛軍
• 申請（專利權）人: 豐益（上海）生物技術研發(fā)中心有限公司
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/16
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔

本發(fā)明提供了一種磷脂酶C組合物。本發(fā)明提供的組合物中包含磷脂酶C酶液和Fe²⁺。本發(fā)明的磷脂酶C組合物能夠在沒有多羥基物質保護劑的情況下，保持長時間的穩(wěn)定，有利于下游的進一步開發(fā)應用。

技術領域

本發(fā)明涉及酶制劑，具體涉及一種提高磷脂酶C穩(wěn)定性的方法。

背景技術

磷脂酶C(phospholipase C，簡稱PLC)是一類可催化水解磷脂C3的磷脂酰鍵的水解酶，在藥品生產、油脂精煉、食品加工、磷脂改性等領域有著廣泛應用。在磷脂酶C的純化過程中，由于磷脂酶C是生物活性物質，需要盡量縮短生產時間，并且全程保持低溫，以保證磷脂酶C的穩(wěn)定性，并且在成品制備中，必須加入常規(guī)多羥基物質如甘油、山梨醇等作為保護劑，延長貨架期，否則容易變渾，然后沉淀失活，但是一旦加入保護劑后，應用范圍變窄，比如磷脂酶C的進一步固定化應用會存在很大影響，一方面因為甘油等多羥基成分極性較強，殘留在固定化磷脂酶C中會吸附極性成分，加速酶的失活，另一面保護劑會干擾載體對磷脂酶C的吸附效率。因此，本行業(yè)急需一種不使用保護劑而能讓磷脂酶C穩(wěn)定的方法，以利于磷脂酶C的生產以及進一步的下游應用開發(fā)。

發(fā)明內容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種磷脂酶C組合物。

本發(fā)明提供的組合物中包含磷脂酶C酶液和Fe²⁺。

在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述Fe²⁺濃度為25-120mg/L。在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述Fe²⁺濃度為為60-120mg/L。

在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述Fe²⁺源自亞鐵離子鹽。在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，亞鐵離子鹽為亞鐵離子無機鹽或亞鐵離子有機鹽。在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，亞鐵離子鹽為FeCl₂、FeSO₄、醋酸亞鐵、和/或富馬酸亞鐵。

在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述磷脂酶C酶液中還包含Cu²⁺，和/或Zn²⁺。在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述磷脂酶C酶液中包含Cu²⁺，F(xiàn)e²⁺,Zn²⁺。

在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述Cu²⁺濃度為25-120mg/L。在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述Cu²⁺濃度為60-120mg/L

在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述Zn²⁺濃度為25-120mg/L。在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述Zn²⁺濃度為60-120mg/L。

在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述磷脂酶C酶液中不含有多羥基物質保護劑，所述多羥基物質保護劑為甘油和山梨醇。

在本發(fā)明的一個或多個優(yōu)選實施方案中，所述磷脂酶C酶液中還包含防腐劑和/或緩沖液。

在本發(fā)明的一個或多個具體實施方案中，所述防腐劑為山梨酸鉀、苯甲酸鈉、丙酸鈣中的一種或多種。在本發(fā)明的一個或多個具體實施方案中，所述緩沖液為醋酸鈉緩沖液。

在本發(fā)明的一個或多個具體實施方案中，所述磷脂酶C為來源于蠟樣芽胞桿菌的磷脂酶C。

本發(fā)明還提供了上述組合物用于脫膠的用途或制備固定化磷脂酶C的用途。在本發(fā)明的一個或多個具體實施方案中，所述脫膠為油脂脫膠。

本發(fā)明還提供了一種提高磷脂酶C穩(wěn)定性的方法。

本發(fā)明提供的方法包括在磷脂酶C酶液中加入Fe²⁺。