[發明專利]一種高亮度、高穩定性的細胞膜碳酸酐酶Ⅸ熒光探針

有效

• 申請號: 201811550668.8
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN111333605B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 徐兆超;周偉;喬慶龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07D311/82
• 分類號: C07D311/82;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種高亮度、高穩定性的細胞膜碳酸酐酶Ⅸ熒光探針，其特征在于該探針的結構如下所示：

其中：n＝0,1,2或3。

2.一種如權利要求1所述高亮度、高穩定性的細胞膜碳酸酐酶Ⅸ熒光探針的合成方法，其特征如下步驟所示：

(1)中間體羅丹明6G-羧酸的合成

羅丹明6G溶于乙醇中，加入強堿試劑的水溶液，回流反應5-10h后，減壓除去有機溶劑，硅膠柱分離，洗脫劑為體積比20-5:1的二氯甲烷和甲醇，減壓除去溶劑后得到中間體；

其中，羅丹明6G與強堿的質量比為1:0.2-0.4，水與乙醇的體積比為1:5-8，羅丹明6G與乙醇的質量與體積比為1:20-40g/mL；

(2)中間體羅丹明6G-琥珀酰亞胺羧酸酯的合成

將羅丹明6G-羧酸，N-羥基琥珀酰亞胺，縮合試劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽依次加入到二氯甲烷中，室溫攪拌10-16h；減壓除去溶劑得粗產品；

其中，羅丹明6G-羧酸與N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的質量比為1:0.2-0.4:0.6-0.8，羅丹明6G-羧酸與二氯甲烷的質量與體積比為1:40-60g/mL；

(3)中間體羅丹明6G-甲胺烷基酸的合成

將羅丹明6G-琥珀酰亞胺羧酸酯粗產品、甲胺烷基酸鹽酸鹽、碳酸鉀依次加入到乙腈中，室溫攪拌過夜；減壓除去溶劑，硅膠柱分離，洗脫劑為體積比50-10:1的二氯甲烷和甲醇，減壓除去溶劑后得紫色固體；

其中，羅丹明6G-琥珀酰亞胺羧酸酯與甲胺烷基酸鹽酸鹽、碳酸鉀的質量比為1:0.3-0.6:0.2-0.4，羅丹明6G-琥珀酰亞胺羧酸酯與乙腈的質量與體積比為10-25:1mg/mL；

(4)探針的合成

將羅丹明6G-甲胺烷基酸、對胺甲基苯磺酸鹽酸鹽、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯并三唑、碳酸鉀依次加入到N,N-二甲基甲酰胺中，室溫攪拌兩天；減壓除去溶劑，硅膠柱分離，洗脫劑為體積比40-3:1的二氯甲烷和甲醇，減壓除去溶劑后得紫色固體；

其中，羅丹明6G-甲胺烷基酸與對胺甲基苯磺酸鹽酸鹽、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯并三唑、碳酸鉀的質量比為1：0.4-0.6：0.4-0.6：0.3-0.5:1-2，羅丹明6G-甲胺烷基酸的質量與N,N-二甲基甲酰胺的體積比為10-20：1mg/mL。

3.根據權利要求2所述高亮度、高穩定性的細胞膜碳酸酐酶Ⅸ熒光探針的合成方法，其特征在于：步驟(1)中強堿試劑為KOH、NaOH、LiOH，反應時間以點板檢測為基準，直到原料反應完全，停止反應。