[發明專利]一種用于四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針及其合成

有效

• 申請號: 201811549890.6
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN111333641B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 徐兆超;喬慶龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C07D471/06
• 分類號: C07D471/06;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001
• 代理人: 張晨

1.一種四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針，其特征在于該探針的結構如下：

2.根據權利要求1所述的一種四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針的合成方法，其特征在于按照如下步驟進行：

(1)中間體的合成：

將4-溴-5-硝基-1,8-萘酐，4-氨基丁酸乙酯鹽酸鹽，三乙胺溶于乙醇中；將反應液加熱至40-90℃，攪拌1-24h；將反應液冷卻至室溫后，減壓除去溶劑后，硅膠柱分離，以體積比1:6-4的二氯甲烷和石油醚為洗脫劑，減壓除去溶劑得米白色固體

(2)中間體的合成：

將溶于乙二醇甲醚中，并向其中依次加入環己二胺；將反應液緩慢升溫至50-140℃，并在氮氣保護下反應10-24h；減壓除去溶劑，硅膠柱分離，以體積比400-50:1的二氯甲烷和甲醇為洗脫劑，除去溶劑，得棕黃色固體

(3)中間體的合成

取溶于甲醇中，并向反應液中滴加2M氫氧化鈉溶液；室溫下反應1-3h后，減壓蒸餾除去甲醇，過濾并用水洗滌濾餅干燥后得

(4)中間體的合成

將二環己基碳二酰亞胺溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺后，室溫攪拌10-40min；N-羥基琥珀酰亞胺溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺并加入反應液中；2-5h后減壓除去溶劑，硅膠柱分離，以體積比20-4:1的二氯甲烷和乙酸乙酯為洗脫劑，除去溶劑后得

(5)熒光探針合成

將與4-(4-甲基-2,3,5,6-氮雜苯)基芐胺三氟乙酸鹽置于史萊克瓶中，并用氮氣置換2-5次；二異丙基乙基胺溶于干燥的二甲基亞砜中并加入反應瓶中；室溫下攪拌3-10h后，水洗并用二氯甲烷萃取得有機相，硅膠柱分離得探針。

3.根據權利要求2所述的一種四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針的合成方法，其特征在于步驟(1)中，4-溴-5-硝基-1,8-萘酐、4-氨基丁酸乙酯鹽酸鹽、三乙胺的質量比為1:1-3:1-3；

4-溴-5-硝基-1,8-萘酐的質量與乙醇的體積比為1:20-80g/mL。

4.根據權利要求2所述的一種四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針的合成方法，其特征在于步驟(2)中，其中，與環己二胺的質量比為1:1-3；

的質量與乙二醇甲醚的體積比為50:1mg/mL。

5.根據權利要求2所述的一種四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針的合成方法，其特征在于步驟(3)中，的質量與甲醇的體積比為4:1mg/mL或者20:1mg/mL；

甲醇與2M氫氧化鈉溶液、水的體積比為1:1:1。

6.根據權利要求2所述的一種四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針的合成方法，其特征在于步驟(4)中，二環己基碳二酰亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺質量比為1:1-5:1-10；

的質量與N,N-二甲基甲酰胺的體積比為10:1mg/mL或25:1mg/mL。

7.根據權利要求2所述的一種四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針的合成方法，其特征在于步驟(5)中，與4-(4-甲基-2,3,5,6-氮雜苯)基芐胺三氟乙酸鹽的質量比為1:1-5；

二異丙基乙基胺與二甲基亞砜的體積比為1:250-1000；

的質量與二甲基亞砜的體積比為5-60:1mg/mL。

8.一種如權利要求1所述的四嗪類生物正交標記的增強型熒光探針的應用，該探針能夠與親二烯發生高速率的生物正交反應用以標記生物分子。