[發明專利]乳酸菌抗菌肽及高效表達及抗菌抗癌活性的應用

有效

• 申請號: 201811548163.8
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN110105433B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 羅學剛;賀軍芳;金杜欣;俞曉亭;張同存
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/31;C12N15/70;A61K38/10;A61P35/00
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

1.一種乳酸菌抗菌肽，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種權利要求1所述的乳酸菌抗菌肽的表達方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1. 合成序列為SEQ ID NO.1的抗菌肽基因序列；

S2. 構建含S1合成出來的抗菌肽基因序列的重組大腸桿菌工程菌；

S3. 抗菌肽融合蛋白的誘導表達；

S4. 抗菌肽的純化。

3.根據權利要求2所述的乳酸菌抗菌肽的表達方法，其特征在于：所述S1過程包括 ：根據干酪乳桿菌基因GenBank：MOAG00000000.1并應用生物信息學工具計算各組合的一級特征參數、預測二級和抗菌活性，設計出具有醫療潛力的抗菌肽序列SEQ ID NO.1；根據大腸桿菌對密碼子的偏愛性將抗菌肽的基因序列翻譯成核酸序列，在其兩端加上Bsa I和HindIII限制性內切酶位點和保護性堿基，合成引物F1、R1，所述引物的核苷酸序列為SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3。

4.根據權利要求2所述的乳酸菌抗菌肽的表達方法，其特征在于：所述 S2 過程包括：構建抗菌肽表達質粒pE-SUMO-LHH1 并測序鑒定，構建基因工程菌株pE-SUMO-EA-LHH1/Rosetta（DE3）pLysS并測序鑒定，測序鑒定的結果為：SEQ ID NO. 4，測序結果使用NCBIBlast與所設計的基因進行對比，選取兩者結果一致的重組菌為測序結果正確的重組菌。

5.根據權利要求2所述的乳酸菌抗菌肽的表達方法，其特征在于：所述S3過程中包括：將步驟S2中測序結果正確的重組菌和含有空載體的對照菌進行平板培養、種子培養，將發酵液中菌體生長到對數期后分別加入 IPTG 誘導表達，然后進行SDS-PAGE 分析和HPLC 分析，選取表達成功的抗菌肽。

6.根據權利要求4所述的乳酸菌抗菌肽的表達方法，其特征在于：所述S4過程包括：將基因工程菌pE-SUMO-EA-LHH1/Rosetta（DE3）pLysS大量培養、誘導，收集菌體并獲得融合蛋白，進行親和層析純化，純化后的融合蛋白經腸激酶切割去除標簽，然后進行定量，純化樣品保留。

7.權利要求1所述的乳酸菌抗菌肽制備抗菌制劑的應用，所述抗菌作用菌株為金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。