[發(fā)明專利]一種積累L-5-甲基四氫葉酸乳酸乳球菌及其構(gòu)建方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811547736.5
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109536430A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉延峰;堵國成;盧川川;李江華;劉龍;陳堅(jiān)
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/74;C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種積累L-5-甲基四氫葉酸的乳酸乳球菌，其特征在于，能夠發(fā)酵生產(chǎn)L-5-甲基四氫葉酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳酸乳球菌，其特征在于，過表達(dá)了5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶、絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶中的至少一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的乳酸乳球菌，其特征在于，以pMG36e為表達(dá)載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的乳酸乳球菌，其特征在于，其特征在于，5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶編碼基因metF含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶編碼基因glyA含有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

5.一種構(gòu)建權(quán)利要求3所述乳酸乳球菌的方法，其特征在于，將5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶編碼基因metF與絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶編碼基因glyA與質(zhì)粒pMG36e連接，轉(zhuǎn)化到乳酸乳球菌中。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶編碼基因metF含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；所述絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶編碼基因glyA含有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

7.一種生產(chǎn)L-5-甲基四氫葉酸的方法，所述方法應(yīng)用權(quán)利要求1～4任一株乳酸乳球菌進(jìn)行發(fā)酵。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，將所述乳酸乳球菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，于28～30℃、靜置條件下發(fā)酵6～10h。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基按g/L計(jì)，含有：大豆蛋白4～8，胰蛋白胨4～6，酵母粉1～4，抗壞血酸0.3～0.6，MgSO₄ 0.2～0.3，K2HPO₄ 8～10，甘油8～12，乳糖4～6，葡萄糖3～6，谷氨酸0.5～1.5，對氨基苯甲酸0.01～0.05。

10.權(quán)利要求1～4任一所述的乳酸乳球菌在制備含L-5-甲基四氫葉酸的產(chǎn)品方面的應(yīng)用。