[發明專利]一種在酵母中表達生產藻藍蛋白α亞基的方法

有效

• 申請號: 201811546535.3
• 申請日: 2018-12-18
• 公開（公告）號: CN109503709B
• 公開（公告）日: 2022-01-25
• 發明（設計）人: 連惠勇
• 申請（專利權）人: 海南熱帶海洋學院
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C12N15/81
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 陳歡

1.一種在酵母中表達生產藻藍蛋白α亞基的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將藻藍蛋白α亞基編碼基因與載體連接，得到重組質粒，所述重組質粒含有啟動子；

(2)制備酵母感受態細胞，將重組質粒經電轉化法轉入酵母感受態細胞，培養得到酵母轉化子，篩選陽性酵母轉化子；

(3)陽性酵母轉化子再轉接入發酵培養基中培養；

所述酵母為釀酒酵母；步驟(2)中采用YNB培養基進行培養，所述YNB培養基包括以下成分：葡萄糖20～25g/L、硫酸銨0.5～0.7g/L、YNB 10～15g/L、亮氨酸20～30μg/L和組氨酸25～35μg/L，pH 5.0～5.5；培養的條件為：20～25℃、280～300r/min震蕩培養15～20h；所述發酵培養基包括以下成分：酵母粉20～25g/L、胰蛋白胨10～15g/L、葡萄糖20～25g/L、甘油1～5g/L、半乳糖2～5g/L和亮氨酸5～20μg/L，pH5.5～6.0；

所述藻藍蛋白源于極大螺旋藻；所述啟動子為GAL1或GAL10；所述載體為pYES2。

2.根據權利要求1所述的在酵母中表達生產藻藍蛋白α亞基的方法，其特征在于，步驟(3)為：陽性酵母轉化子轉接入發酵培養基中，30～38℃、200～230r/min發酵培養36～48h，收集菌體，即得。

3.根據權利要求1所述的在酵母中表達生產藻藍蛋白α亞基的方法，其特征在于，在發酵過程中，保持發酵罐中DO值始終維持25～30％。

4.根據權利要求1所述的在酵母中表達生產藻藍蛋白α亞基的方法，其特征在于，發酵培養24h后向發酵液中添加半乳糖、組氨酸、丙酮酸鈉和毛子草酮的混合物，其中，半乳糖、組氨酸、丙酮酸鈉和毛子草酮的質量比為100:1:0.5:0.1，混合物的添加量為35g/L發酵液。