[發明專利]一種煙葉中蘇糖酸和蘇糖酸酯的GC-MS分析方法

有效

• 申請號: 201811545364.2
• 申請日: 2018-12-17
• 公開（公告）號: CN110487922B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 劉鴻;李小蘭;吳晶晶;陳峰;王冰;黃善松;周蕓;王曉瑜;余晶晶;張曉兵;范忠
• 申請（專利權）人: 廣西中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 李紅團

本發明公開了一種分析煙葉中蘇糖酸和蘇糖酸內酯的氣相色譜?質譜聯用分析方法，煙葉樣品經二氯甲烷和水依次萃取后，二氯甲烷萃取液直接進行硅烷化衍生反應，然后采用GC?MS分析其中的蘇糖酸內酯；取一定量水萃取液，經氮吹儀吹干，硅烷化反應，采用GC?MS分析其中的蘇糖酸。本發明首次發現煙葉中蘇糖酸以原型和內酯兩種形態存在，采用二氯甲烷和水依次提取方式，提取了煙葉中的蘇糖酸內酯及蘇糖酸，對二氯甲烷提取液及水提取液均采用硅烷化方法，實現了煙葉中蘇糖酸內酯和蘇糖酸的同時分析。

技術領域

本發明屬于煙葉成分分析測定技術領域，具體涉及一種氣相色譜-質譜法檢測煙葉中蘇糖酸及蘇糖酸內酯。

背景技術

L-蘇糖酸廣泛地存在于自然界和動物體內。早在20世紀30年代，人們就發現蘇糖酸是維生素C的降解產物之一，是一個四碳手性酸，具有良好的穿透生物膜效應，從而具有重要的生物功能。L-蘇糖酸作為離子的載體使金屬離子易與氨基酸或蛋白質結合而被動物吸收和利用。正是由于L-蘇糖酸在自然界中和動物體內的廣泛存在，以及在人體內較高的生物活性和生理作用，使得人們越來越多地將目光投向了蘇糖酸及其化合物的研究。煙草中存在各種內酯類香味物質，-CO-O-C-是致香基團，它們是水果和奶制品中的主要香味成分。在煙草中研究較多的有二氫獼猴桃內酯，α-當歸內酯等，但至今未見有蘇糖酸內酯的報道。

人們通過GC、GLC、HPLC等方法分離鑒定了一些植物中的蘇糖酸，在動物體內，通過HPLC-MS-MS等方法，在尿液、血漿乃至組織中鑒定出了蘇糖酸。但到目前為止，蘇糖酸的分析方法依然有待改善。而關于蘇糖酸內酯的分析報道至今沒有。

本研究發現煙草中同時存在蘇糖酸及蘇糖酸內酯，為了更好的研究煙草的生理活性及致香機理，建立了分析檢測煙草中蘇糖酸及蘇糖酸內酯的GC-MS同時分析方法。

發明內容

本發明的目的正是針對上述現有技術狀況而專門提供一種檢測煙葉中蘇糖酸及蘇糖酸內酯的衍生化GC-MS方法。利用該方法可以測定煙葉中的蘇糖酸內酯及蘇糖酸。

本發明的目的是通過以下方案來實現的：

一種同時測定煙葉中蘇糖酸及蘇糖酸內酯的衍生化GC-MS方法：煙葉進行粉碎后過篩備用。用二氯甲烷和水依次渦旋提取煙粉中蘇糖酸內酯及蘇糖酸，硅烷化反應后，進GC-MS分析。

本發明的具體步驟如下：

(1)煙葉的粉碎：將煙絲或調制煙葉過的煙葉粉碎至40～60目，放于-20℃冰箱保存；

(2)煙葉中蘇糖酸及蘇糖酸內酯的萃取：稱量0.5～1g粉碎后的煙葉于16ml離心管中，加入5～10mL二氯甲烷(含內標氘代十六烷酸50μg/mL)渦旋萃取15～30min，取二氯甲烷萃取液備用。取1～2mL二氯甲烷萃取液過濾后，風干，再加入5～10mL水(含內標氘代十六烷酸50μg/mL)，渦旋萃取15～30min，取水萃取液備用。

(3)硅烷化衍生反應：取水萃取液過水相濾膜，取萃取液0.5mL，用氮吹儀吹干。取二氯甲烷萃取液過有機相濾膜，取萃取液0.5mL直接與水萃取液吹干樣品合并；加入雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)衍生試劑50～150μL于60℃下衍生化反應10～40min，然后進GC-MS/MS儀器檢測。

(4)檢測：采用GC-MS進行檢測分析。色譜條件如下：

進樣口溫度：280℃；進樣量：1.0μL；分流比10:1；載氣：氦氣，恒流流速1.0mL/min；色譜柱：DB-5MS色譜柱(60m×0.25mm i.d.×0.25μm d.f.)；程序升溫：60℃保持2min，然后以3℃/min的速率升至150℃，再以5℃/min的速率升至200℃，最后以30℃/min的速率升至280℃，保持20min。

電離方式：EI；傳輸線溫度：280℃；離子源溫度：300℃。