[發(fā)明專利]一種采用離體葉片接種玉米灰斑病和發(fā)病的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811545301.7 | 申請日： | 2018-12-17 |
| 公開（公告）號： | CN109439551A | 公開（公告）日： | 2019-03-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 謝宗宜 | 申請（專利權(quán)）人： | 靖西市秀美邊城農(nóng)業(yè)科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/14 | 分類號： | C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京天奇智新知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11340 | 代理人： | 牙斐穎 |
| 地址： | 533800 廣西壯族自治區(qū)*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 接種 離體葉片 玉米灰斑病 灰斑 病原菌 抗病性 保濕培養(yǎng) 發(fā)病條件 季節(jié)限制 快速鑒定 培養(yǎng)接種 有效解決 玉米植株 灰斑病 種植物 重現(xiàn)性 葉片 發(fā)病率 成活 室內(nèi) 占用 培育 申請 應(yīng)用 | ||
1.一種采用離體葉片接種玉米灰斑病和發(fā)病的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(1)培育感病玉米植株：選擇玉米灰斑病感病品種種植于花盆中，常規(guī)水肥管理，得到灰斑病易感植株；
(2)培養(yǎng)接種用病原菌：將從田間采集灰斑病感病葉片接種到含煙酰胺的玉米芯高粱粒粉培養(yǎng)基上，放置于溫度為25℃～28℃的人工培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d～7d。
(3)采集離體葉片：從步驟(1)盆栽的灰斑病易感植株中取新鮮干凈無病害葉片，裝于內(nèi)放有冰袋或干冰盒子中，4℃帶回室內(nèi)；
(4)接種離體葉片：離體葉片用剪刀剪成長約3cm，用小刀或鋼珠在葉片小塊上輕劃或輕輕摩擦制造微傷口，傷口以只損傷表皮為準(zhǔn)，挑取1cm長的正方形菌絲瓊脂塊，菌絲朝下緊貼放在離體葉片傷口上；
(5)保濕培養(yǎng)葉片：每天用保濕液均勻噴灑步驟(4)接種的離體葉片，離體葉片放入培養(yǎng)基中，于人工氣候培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)10d～15d。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟(2)所述從田間采集灰斑病感病葉片進(jìn)行如下處理后再接種于玉米芯高粱粒粉培養(yǎng)基：將灰斑病感病葉片剪成一半有病斑一半健康無病斑長1cm的正方形小塊，2％次氯酸鈉消毒30s，用滅菌蒸餾水清洗3次，過濾紙吸干。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟(2)所述玉米芯高粱粒粉培養(yǎng)基配方為：玉米芯15g，高粱粒粉5g，瓊脂15g，蒸餾水定容至1000ml，1mol/ml煙酰胺母液20ml～40ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟(3)所述新鮮干凈無病害葉片，為大喇叭口時(shí)期玉米植株的頂部2片葉。
5.根據(jù)根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟(5)所述離體葉片噴灑的保濕液配方為：蔗糖5g，食鹽12g，6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)10mg，蒸餾水定容至1000ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，步驟(5)所述人工氣候培養(yǎng)箱設(shè)置溫度和濕度分別為25℃～28℃、濕度為90％～95％。
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