[發明專利]內胚層干細胞規模化制備功能性肝母細胞與肝實質細胞的方法及其應用

在審

• 申請號: 201811545297.4
• 申請日: 2018-12-17
• 公開（公告）號: CN111394297A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 程新;馮思思;吳佳穎;鄧小剛
• 申請（專利權）人: 中國科學院分子細胞科學卓越創新中心
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0735;C12N5/10;A61K35/407;A61P1/16
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 王正君;崔佳佳

1.一種誘導人類內胚層干細胞分化為肝母細胞和/或肝實質細胞的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)在第一培養條件下，在培養體系中培養內胚層干細胞，從而獲得經肝臟特化的肝向內胚層(Hepatic Endoderm)細胞；其中，所述培養體系包括bFGF、VEGF、EGF、和BMP4因子；

(b)在適合培養的條件下，在培養體系中培養步驟(a)獲得的肝向內胚層(HepaticEndoderm)細胞，從而獲得肝母細胞；和

(c)在第二培養條件下，在培養體系中培養步驟(b)獲得的肝母細胞，從而獲得肝實質細胞；其中，所述培養體系包括HGF、OSM、Dex、Compound E、和/或A83。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中，所述培養體系為含有第二培養基和添加物的培養液，所述添加物包括bFGF、VEGF、EGF、HGF、OSM、和Dex因子。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(a)－(c)中，所述培養體系中還含有促進分化的其他物質，選自下組：基質膠(Matrigel)、層粘連蛋白(Laminin)、基底膜提取物(Basement Membrane Extracts)、或其組合。

4.一種肝母細胞，其特征在于，所述肝母細胞為封閉的具有中空結構的單層細胞球囊，其中，所述肝母細胞的球囊直徑大小300－500μm，球囊表面肝母細胞大小60-80μm，細胞層厚度6－12μm。

5.一種肝實質細胞，其特征在于，所述肝實質細胞為封閉的具有中空結構的單層細胞球囊，其中，所述肝實質細胞的球囊直徑大小300－500μm，球囊表面肝實質細胞大小80-100μm，細胞層厚度8－15μm。

6.一種權利要求4所述肝母細胞或權利要求5所述的肝實質細胞的用途，其特征在于，用于制備治療肝臟相關疾病的藥物組合物。

7.一種組合物，其特征在于，所述藥物組合物含有權利要求4所述的肝母細胞和/或權利要求5所述的肝實質細胞。

8.一種誘導培養基，其特征在于，所述誘導培養基含有基礎培養基和添加物；其中所述基礎培養基選自下組：SFD、DMEM、DMEM/F12、HCM、或其組合；并且，所述添加物包括HGF、OSM、Dex、Compound E、和/或A83。

9.一種誘導組合物，其特征在于，包括：

(a)第一誘導因子，所述第一誘導因子包括bFGF、VEGF、EGF、和BMP4因子；

(b)第二誘導因子，所述第二誘導因子包括bFGF、VEGF、EGF、HGF、OSM、和Dex因子；

(c)第三誘導因子，所述第三誘導因子包括HGF、OSM、Dex、Compound E、和/或A83；和

(d)促進分化的其他物質，所述促進分化的其他物質選自下組：基質膠(Matrigel)、層粘連蛋白(Laminin)、基底膜提取物(Basement Membrane Extracts)、或其組合。

10.權利要求9所述的誘導組合物的用途，其特征在于，用于誘導內胚層干細胞分化為肝母細胞和/或肝實質細胞。