[發(fā)明專利]一種采用玉米干種子快速檢測(cè)粒腐病抗性的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811545294.0
• 申請(qǐng)日: 2018-12-17
• 公開（公告）號(hào): CN109504736A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝宗宜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 靖西市秀美邊城農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/18
• 分類號(hào): C12Q1/18;C12R1/77;C12R1/80;C12R1/66;C12R1/645
• 代理公司: 北京天奇智新知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11340
• 代理人: 牙斐穎

本發(fā)明涉及一種植物抗病性領(lǐng)域，特別涉及一種采用玉米干種子快速檢測(cè)粒腐病抗性的方法，本申請(qǐng)的步驟如下：(1)玉米粒接種前準(zhǔn)備；(2)制備致病菌孢子懸浮液；(3)接種籽粒；(4)保濕培養(yǎng)籽粒。該方法接種用致病菌種類多，接種材料為干種子，隨取隨用，操作簡(jiǎn)單，在室內(nèi)就能完成，不受季節(jié)限制，占用場(chǎng)地少，效率高，重現(xiàn)性好，有效縮短玉米粒腐病抗性檢測(cè)時(shí)間，有助于快速檢測(cè)粒腐病抗性，應(yīng)用價(jià)值大。

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及一種植物抗病性技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及本一種采用玉米干種子快速檢測(cè)粒腐病抗性的方法。

【背景技術(shù)】

玉米粒腐病是玉米生長(zhǎng)后期的重要病害之一，是一種世界性病害。它具有蔓延快，危害嚴(yán)重，造成玉米減產(chǎn)、降低玉米品質(zhì)的特點(diǎn)。它是由多種真菌侵染引起的病害，由禾谷鐮刀菌、串株鐮刀菌、層出鐮刀菌、青霉菌、曲霉菌、枝孢菌、單瑞孢菌等近20多種霉菌單一或復(fù)合浸染引起的病害。

粒腐病危害玉米果穗和籽粒，造成大片或整個(gè)果穗腐爛，病粒皺縮、無(wú)光澤、不飽滿，造成減產(chǎn)，影響帶菌種子發(fā)芽率和幼苗成活率。而黃曲霉、鐮刀菌霉菌在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生毒素，由它所引起的粒腐病籽粒在制成產(chǎn)品或直接供人食用時(shí)，會(huì)造成頭暈?zāi)垦！盒摹I吐。染病籽粒作為飼料時(shí)，常引起豬的嘔吐，嚴(yán)重的會(huì)造成家畜家禽死亡。

對(duì)玉米粒腐病的防治方法有：種植抗病品種、農(nóng)業(yè)防治和化學(xué)防治，其中，種植抗病品種是最直接有效的防治方法。因此，快速高效檢測(cè)出玉米粒腐病的抗性，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前，我國(guó)常用的粒腐病抗性檢測(cè)方法為：采用感病果穗上分離出的致病優(yōu)勢(shì)菌禾谷鐮刀菌或次優(yōu)勢(shì)菌病串珠鐮刀菌，接種在活體玉米植株果穗上，人工接種引發(fā)病害發(fā)生。該檢測(cè)方法的致病菌單一，研究具有季節(jié)性，周期較長(zhǎng)，耗費(fèi)較大場(chǎng)地和人力。

【發(fā)明內(nèi)容】

鑒于上述內(nèi)容，本發(fā)明提供一種采用玉米干種子快速檢測(cè)粒腐病抗性的方法，以干種子為接種對(duì)象，以多種病菌作為接種致病菌，高效引發(fā)籽粒發(fā)病大方法。該方法接種用致病菌種類多，接種材料隨取隨用，沒(méi)有季節(jié)限制，有效提高發(fā)病效果，縮短了病害抗性鑒定時(shí)間，整套技術(shù)操作簡(jiǎn)單、易學(xué)易懂，室內(nèi)就能完成，占用場(chǎng)地少，花費(fèi)人力，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案，包括以下步驟：

(1)玉米粒接種前準(zhǔn)備：選擇干凈、健康的玉米易感品種干種子，清洗干凈，干種子用醋酸青鮮素溶液浸泡，干種子基部尖端去掉，露出種臍，于4℃～8℃冰箱存放，待接種用；

(2)制備粒腐病孢子懸浮液：從田間選取粒腐病嚴(yán)重的玉米果穗，用無(wú)菌水浸泡10min；反復(fù)用蒸餾水洗脫3次，每次洗脫蒸餾水用量50ml，浸泡液和洗脫液混合后，以6500～7000rap/min轉(zhuǎn)速離心20min，去除離心管內(nèi)上清液，保留底部沉淀，重復(fù)離心3次，直至洗脫液全部被離心；最后收集離心管底部沉淀，靜置，用無(wú)菌水配成孢子懸浮液；

(3)接種玉米粒：將玉米粒基部朝下，豎直放置于內(nèi)含孢子懸浮液和玉米芯的濾紙培養(yǎng)皿中，種臍與孢子懸浮液相觸；

(4)發(fā)病培養(yǎng)：將步驟(3)中的濾紙培養(yǎng)皿放置于人工培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，人工氣候培養(yǎng)箱溫度為25℃～28℃，濕度為75％～95％。

進(jìn)一步的，所述步驟(1)醋酸青鮮素溶液，醋酸濃度為2mol/L～8mol/L，青鮮素濃度為10mg/L～25mg/L，浸泡種子的溫度和時(shí)間分別為25℃～28℃、6～16h。

進(jìn)一步的，所述步驟(2)配置的孢子懸浮液中真菌活菌數(shù)濃度為：5×10⁴～8×10⁴個(gè)/ml。

進(jìn)一步的，所述步驟(3)內(nèi)含孢子懸浮液和玉米芯的濾紙培養(yǎng)皿制備方法為：將無(wú)菌濾紙放置在培養(yǎng)皿中，再倒入孢子懸浮液，孢子懸浮液以淹沒(méi)濾紙為準(zhǔn)，再將玉米芯均勻?yàn)⒃跒V紙上。