[發(fā)明專利]一種脫細(xì)胞血管基質(zhì)及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811545271.X
• 申請日: 2018-12-17
• 公開（公告）號: CN109529121A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙子建;王建英;李芳紅;潘璐琪;馮文金;史啟
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江華臻醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11250
• 代理人: 李靜

1.一種脫細(xì)胞血管基質(zhì)的制備方法，其特征在于，將血管組織依次通過低滲處理、胰蛋白酶處理、去污劑處理和核酸酶處理，制得血管基質(zhì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在低滲處理中，將血管組織加入低滲溶液中孵育，孵育溫度為2-6℃，孵育時間為15-30h；

優(yōu)選地，所述低滲溶液為超純水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，在胰蛋白酶處理中，將血管組織加入胰蛋白酶溶液中，在37℃下水浴加熱0.5-3h；

優(yōu)選地，所述胰蛋白酶溶液為含0.1-0.5％(m/v)胰蛋白酶；

更優(yōu)選地，所述胰蛋白酶溶液為含0.1-0.5％(m/v)胰蛋白酶和0.01-0.05％(m/v)EDTA的PBS溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述PBS溶液的濃度為0.01M，pH為7.4。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的制備方法，其特征在于，在去污劑處理中，將血管組織加入去污劑溶液中，在溫度為15-25℃下振蕩處理15-30h；

優(yōu)選地，所述去污劑溶液為含0.5-3％(v/v)Triton-X100和0.5-3％(m/v)SDS的PBS溶液；

優(yōu)選地，在所述去污劑處理之后還包括α-1,3-半乳糖苷酶溶液處理，在α-1,3-半乳糖苷酶溶液處理中，將血管組織加入含10-40μg/mLα-1,3-半乳糖苷酶的PBS溶液中，在25-37℃浸泡1-6小時。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的制備方法，其特征在于，在核酸酶處理中，將血管組織加入緩沖細(xì)胞液中，然后加入30-60U/ml的DNA酶和0.5-4U/ml的RNA酶，在35-40℃下水浴加熱1-6h。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述緩沖細(xì)胞液為含5-30mM氯化鎂的Tris-Hcl溶液，所述Tris-Hcl溶液的濃度為30-60mM，pH為7-8。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，在核酸酶處理之后還包括滅菌處理；

優(yōu)選地，在滅菌處理中，將血管組織加入消毒液中浸泡1-6h，所述消毒液為含有0.05-0.4vt％乙酸和0.05-0.4wt％次氯酸鈉的PBS溶液，或

含有0.05-0.4vt％乙酸和0.05-0.4vt％84消毒液的PBS溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8所述的制備方法，其特征在于，軟骨組織在低滲處理之前還包括前清洗處理；在低滲處理、胰蛋白酶處理、去污劑處理和核酸酶處理之后還包括中間清洗處理；在核酸酶處理之后還包括后清洗處理；

優(yōu)選地，在前清洗處理中，將血管組織加入生理鹽水中浸泡，然后加入超純水中超聲清洗，再用超純水持續(xù)沖洗；

優(yōu)選地，在中間清洗處理中，將血管組織加入超純水中超聲清洗，再用超純水持續(xù)沖洗；

優(yōu)選地，在后清洗處理中，將血管組織加入無菌PBS中浸泡。

10.一種權(quán)利要求1-9中任一所述的制備方法制得的脫細(xì)胞血管基質(zhì)。