[發明專利]多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 201811543444.4
• 申請日: 2018-12-17
• 公開（公告）號: CN109580951A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 田曉麗
• 申請（專利權）人: 寧波美麗人生醫藥生物科技發展有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N21/64
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 王闖

本發明涉及檢測試劑盒技術領域，公開了多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒及其使用方法。本發明提供的多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒包括清洗緩沖液、Luminex熒光微球和藻紅蛋白標記的二抗，Luminex熒光微球分別與AFP、AFP?L3、GPC3、MDK、SCCA和DCP六種捕獲抗體分子共價結合，從而具有不同的顏色編碼，并且通過檢測血清中的AFP、AFP?L3、GPC3、MDK、SCCA和DCP的含量來診斷早期肝癌。本發明提供的多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒及其使用方法可以對AFP、AFP?L3、GPC3、MDK、SCCA和DCP指標進行檢測，準確率高，敏感度得到提升。

技術領域

本發明屬于檢測試劑盒技術領域，具體涉及多抗體聯合檢測早期肝癌標志 物的試劑盒及其使用方法。

背景技術

肝癌是惡性程度極高，預后極差的惡性腫瘤，被稱為“癌中之王”。全世界 半數左右的肝癌患者集中在中國，我國每年約有11萬人死于肝癌，肝癌居惡性 腫瘤病死率的第二位。目前臨床肝癌診療中還存在著早期診斷難、復發轉移率 高、治療缺乏針對性、源頭創新藥物和治療手段少等問題，因此，對肝癌分子 發病機制及肝癌診治新技術、新療法的研究尤為重要和迫切。

早期、正確的診斷對肝癌患者至關重要。21世紀的肝癌診斷包括對肝癌的 病理診斷、臨床分期診斷、復發和轉移的診斷、療效和預后的判斷以及將要開 展的對肝癌分子分型的診斷。我國在70年代肝癌普查基礎上建立的“B超+AFP” 診斷方法仍是目前肝癌早期診斷的主要依據，并隨現代影像學的技術進步而發 展。甲胎蛋白(AFP)屬美國70年代研發，80年代上市產品，已失去專利保護， 同時其臨床缺陷，比如靈敏度和準確性低已被廣泛認識。

小扁豆素結合型甲胎蛋白異質體(AFP-L3)是肝癌細胞所特有的一種物質， 相比較影像技術，甲胎蛋白異質體AFP-L3可以提前9-12個月被檢測出，AFP-L3 占總AFP超過10％，提示肝癌的發生率大于95％，這大大提高了肝癌的檢查率， 對于肝癌的早發現早治療有著重要的意義。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)在調控細胞生長和分化方面起重要作用， 與肝癌的發生、發展密切相關。GPC3在肝癌組織中特異性高表達，從而提示GPC3對肝癌診斷具有明顯的靈敏性和特異性,可作為肝癌治療的新靶點。

中期因子(MDK)是一種新發現的肝素結合生長因子，可促進多種細胞的 生長、存活和遷移，其在多方面顯示出與腫瘤發生有關的活性，包括促有絲分 裂、促血管生成、誘導細胞惡性轉化等。與周圍非癌組織相比MDK在肝癌組織 中出現過表達，并且在腫瘤早期、潛伏期和癌前病變階段也呈高水平表達。

鱗狀細胞癌抗原(SCCA)是從宮頸鱗狀上皮細胞癌組織提取的腫瘤相關抗 原TA-4，正常人血清含量極微＜2.5μg/L。SCCA是鱗癌的腫瘤標志物，適用于 宮頸癌、肺鱗癌、食管癌、頭頸部癌，膀胱癌的輔助診斷，治療觀察和復發監 測。

異常凝血酶原(DCP)是產生于腫瘤細胞的不正常的凝血酶原，與正常凝 血酶原相比，DCP的分子結構特點是其Gla domain結構域中的一個或多個Glu 殘基(Glu residu)s沒有被完全羧化(γ-carboxylated)成為Gla，從而失去凝血 功能。大約50至60％的肝癌患者DCP水平升高。由于肝病本身可以引起AFP 水平的增高，但不能導致DCP水平的增高，所以DCP診斷HCC比AFP更特 異。

Luminex熒光微球為用不同配比的兩種紅色分類熒光染料將直徑為5.6微米 的聚苯乙烯微球染成不同的熒光色，從而獲得多達100種熒光編碼的微球。把 針對不同待測物的抗體分子或者基因探針以共價交聯的方式結合到特定的編碼 微球上，每個編碼微球都對應相應的檢測項目。先把針對不同待測物的熒光編 碼微球混合，然后加入待測物質或者待測的擴增片段，所形成的復合物再與標 記熒光素發生結合反應。微球在流動鞘液的帶動下單列依次通過紅綠激光，紅 激光用來判定微球的熒光編碼，綠激光用來測定微球上報告分子的熒光強度。 從而達到快速準確的定量檢測目的。