[發明專利]多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒及其使用方法在審
| 申請號： | 201811543444.4 | 申請日： | 2018-12-17 |
| 公開（公告）號： | CN109580951A | 公開（公告）日： | 2019-04-05 |
| 發明（設計）人： | 田曉麗 | 申請（專利權）人： | 寧波美麗人生醫藥生物科技發展有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/574 | 分類號： | G01N33/574;G01N21/64 |
| 代理公司： | 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260 | 代理人： | 王闖 |
| 地址： | 315899 浙江省寧*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 早期肝癌 聯合檢測 標志物 試劑盒 抗體 熒光微球 藻紅蛋白標記 清洗緩沖液 捕獲抗體 共價結合 檢測試劑 顏色編碼 敏感度 血清 檢測 準確率 二抗 診斷 | ||
1.多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒，其特征在于，包括清洗緩沖液、Luminex熒光微球和藻紅蛋白標記的二抗，
所述清洗緩沖液為0.01mol/L PBS中加入0.05％Tween-20，pH調節為7.4，
所述藻紅蛋白標記的二抗為藻紅蛋白標記的羊抗小鼠免疫球蛋白G，且濃度為0.1-0.12mg/ml，
所述Luminex熒光微球包括包被AFP捕獲抗體的微球、包被AFP-L3捕獲抗體的微球、包被GPC3捕獲抗體的微球、包被MDK捕獲抗體的微球、包被SCCA捕獲抗體的微球和包被DCP捕獲抗體的微球，所述Luminex熒光微球中包被不同捕獲抗體的微球具有不同的顏色編碼。
2.根據權利要求1所述的多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒，其特征在于，所述Luminex熒光微球為SeroMap微球。
3.多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)用所述清洗緩沖液濕潤濾過板，通過真空抽濾去除所述濾過板的液體；
(2)制備緩沖液，用所述緩沖液將待檢測的血清樣本稀釋5-10倍；
(3)將步驟(2)中的血清樣本分別加入步驟(1)中的濾過板；
(4)用所述清洗緩沖液稀釋所述Luminex熒光微球為(0.5-1.5)*105個/ml，將稀釋后的Luminex熒光微球加入步驟(3)中的濾過板；
(5)將步驟(4)中的濾過板置于室溫避光環境下振蕩孵育，振蕩時間為30-90分鐘，用真空抽濾去除所述濾過板的孔內液體；
(6)向步驟(5)中的濾過板的每個孔中加入用所述清洗緩沖液稀釋200-800倍的所述藻紅蛋白標記的二抗，在室溫避光環境下振蕩孵育，振蕩時間為20-60分鐘，加入清洗緩沖液，在室溫避光條件下振蕩4-10分鐘；
(7)將步驟(6)中的濾過板放入Luminex200讀取各孔熒光值；
(8)根據熒光強度獲得所述待測血清樣本中AFP、AFP-L3、GPC3、MDK、SCCA和DCP的理論濃度值。
4.根據權利要求3所述的多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟(1)至步驟(7)中使用的所述濾過板為96孔濾過板。
5.權利要求3所述的多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟(2)中制備緩沖液的步驟包括以下步驟：
在所述清洗緩沖液中加入10％羊血清。
6.權利要求3所述的多抗體聯合檢測早期肝癌標志物的試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟(5)、步驟(6)中，振蕩操作的轉速為600-800r/分鐘。
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