[發明專利]用于檢測碳青霉烯類耐藥基因NDM1-24亞型的LAMP引物組合及其應用

在審

• 申請號: 201811540106.5
• 申請日: 2018-12-17
• 公開（公告）號: CN109628616A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 張巖;陳燕旌;邢婉麗;高占成;程京
• 申請（專利權）人: 博奧生物集團有限公司;北京大學人民醫院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京開陽星知識產權代理事務所(普通合伙) 11710
• 代理人: 姚金金

1.用于檢測碳青霉烯類耐藥基因NDM1-24亞型的LAMP引物組合，其特征在于，所述引物組合由外引物-F3、外引物-B3、內引物-FIP、內引物-BIP、環引物-LF和環引物-LB組成，

所述外引物-F3為如下(a1)或(a2)：

(a1)如SEQ ID NO.1所示的單鏈DNA分子；

(a2)含有(a1)的DNA分子；

所述外引物-B3為如下(a3)或(a4)：

(a3)如SEQ ID NO.2所示的單鏈DNA分子；

(a4)含有(a3)的DNA分子；

所述內引物-FIP為如下(a5)或(a6)：

(a5)如SEQ ID NO.3所示的單鏈DNA分子；

(a6)含有(a5)的DNA分子；

所述內引物-BIP為如下(a7)或(a8)：

(a7)如SEQ ID NO.4所示的單鏈DNA分子；

(a8)含有(a7)的DNA分子；

所述環引物-LF為如下(a9)或(a10)：

(a9)如SEQ ID NO.5所示的單鏈DNA分子；

(a10)含有(a9)的DNA分子；

所述環引物-LB為如下(a11)或(a12)：

(a11)如SEQ ID NO.6所示的單鏈DNA分子；

(a12)含有(a11)的DNA分子。

2.含有權利要求1所述的引物組合的試劑或試劑盒。

3.根據權利要求2所述的試劑或試劑盒，其特征在于，所述引物組合中，外引物-F3、外引物-B3、內引物-FIP、內引物-BIP、環引物-LF和環引物-LB的摩爾比為0.3：0.3：2.4：2.4：1：1。

4.根據權利要求3所述的試劑或試劑盒，其特征在于，所述引物組合中的各條引物單獨包裝。

5.根據權利要求2～4任一項所述的試劑或試劑盒，其特征在于，所述試劑或試劑盒的用途包括但不限于：

(1)鑒定碳青霉烯類耐藥基因NDM；

(2)用于檢測待測樣本中是否含有碳青霉烯類耐藥基因NDM；

(3)用于檢測待測微生物是否為碳青霉烯類耐藥微生物。

6.權利要求1所述的引物組合在檢測待測樣本中是否含有碳青霉烯類耐藥基因NDM中的應用。

7.一種檢測待測樣本中是否含有碳青霉烯類耐藥基因NDM的方法，包括如下步驟：

(1)提取待測樣本的總DNA；

(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，采用權利要求1所述的引物組合進行環介導等溫擴增，根據擴增結果判斷待測樣本中是否含有碳青霉烯類耐藥基因NDM。

8.權利要求1所述的引物組合在檢測待測微生物是否為碳青霉烯類耐藥微生物中的應用。

9.一種檢測待測微生物是否為碳青霉烯類耐藥微生物的方法，包括如下步驟：

(1)提取待測微生物的基因組DNA；

(2)以步驟(1)提取的基因組DNA為模板，采用權利要求1所述的引物組合進行環介導等溫擴增，根據擴增結果判斷待測微生物是否為碳青霉烯類耐藥微生物。

10.根據權利要求7或9所述的方法，其特征在于，所述環介導等溫擴增的反應條件為65℃恒溫50min。