[發明專利]一種疫苗抗原組合物及其制備方法

有效

• 申請號: 201811534732.3
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN109464661B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 張松平;蘇志國;林旋;楊延麗
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K9/08;A61K39/39;A61K47/18;A61P31/14;A61P31/20
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種疫苗抗原組合物，所述組合物包括疫苗抗原和膽堿型離子液體。本發明的疫苗抗原組合物通過添加具有良好生物相容性的膽堿型離子液體作為添加劑，顯著提高疫苗抗原的熱穩定性、反復凍融穩定性、加速穩定性以及長期儲存穩定性，顯著提高抗原在溶液和佐劑環境中的穩定性且不影響抗原活性。

技術領域

本發明屬于疫苗研究領域，涉及一種疫苗抗原組合物及其制備方法，尤其涉及一種包含膽堿型離子液體的疫苗抗原組合物及其制備方法。

背景技術

抗原是疫苗的最主要組成成分，基于病毒顆粒的抗原是目前在人用疫苗和獸用疫苗領域應用最為廣泛的抗原類型。這類抗原主要包括病毒類疫苗抗原和重組病毒樣顆粒疫苗抗原。這類抗原在結構上通常具有組成復雜，顆粒尺寸大的特點。天然的病毒顆粒結構相對穩定，但是作為抗原使用的病毒顆粒經過減毒、滅活或重新組裝過程后，其天然結構受到破壞，穩定性下降，極其容易發生裂解或聚集而失活。隨著對疫苗質量和安全性要求的提高，需要對原料進行純化制備高純度的抗原，而純化的過程和較高的純度則又進一步降低了抗原的穩定性。另一方面，抗原通常還需要和佐劑配合使用，佐劑中的成分也通常會對抗原的穩定性造成破壞。

例如，口蹄疫(Foot and Mouth Disease，FMD)是一種傳染性很強的疾病，該疾病具有傳染速度快，傳播范圍廣等特點，因此感染該疾病會給畜牧業造成巨大的損失。滅活口蹄疫病毒疫苗抗原是預防FMD最有效的疫苗。完整的口蹄疫病毒顆粒沉降系數為146S(即FMDV 146S)，結構組成復雜，顆粒尺寸大(約為30nm)，且穩定性非常差，在加熱和pH7.0時候極其容易發生裂解失活。Harmsen M M等在Vaccine(2015，33(21):2477-2484)中報道了油乳佐劑ISA206會進一步加速口蹄疫病毒抗原的裂解。這使得疫苗的運輸和保存需要嚴格的冷鏈，增加了疫苗的研發、生產、運輸、儲存和使用的難度和成本。因此，提高疫苗抗原穩定性一直是口蹄疫疫苗的重點研究領域之一。

我國是乙肝大國，目前預防乙肝的疫苗是基因重組的乙肝表面抗原病毒樣顆粒(HBsAg-VLP)，由上百個亞基組成，尺寸25nm左右。HBsAg-VLP在分離純化和儲存過程中，很容易發生裂解或聚集。Valenzuela P等在Nature(1982,298(5872):347-350)中報道了裂解或聚集的HBsAg-VLP，活性僅有正常VLP抗原的千分之一。

人乳頭瘤病毒樣顆粒(HPV-VLP)作為宮頸癌疫苗的抗原在預防HPV的入侵上發揮著重要作用。HPV-VLP由基因重組的方法制備獲得，其保留了和天然HPV病毒相似的結構和抗原表位。史晶潔等在病毒學報(2018，34(02):252-258)中報道了HPV-VLP顆粒的完整性和熱穩定性是HPV疫苗達到理想免疫效果的關鍵。解聚或聚集的亞基，不僅導致活性的降低，而且成為新的雜質，可能引起產品質量的問題。

如何提高病毒或病毒樣顆粒疫苗抗原的結構穩定性，避免亞基解聚或聚集，是確保其活性和安全性的關鍵。目前提高病毒顆粒抗原穩定性的方法主要有兩類，第一是通過對疫苗抗原顆粒結構改造如對造成顆粒不穩定的關鍵氨基酸位點進行突變或者通過氨基酸突變來增強組成顆粒亞基之間的相互作用力，防止顆粒裂解以提高顆粒的穩定性。但是這類方法僅針對特定種類特定亞型的抗原有效，通用性差，對抗原顆粒的活性影響不可控，且這類方法技術復雜，成本較高，在大規模應用上存在一定難度。第二是通過在抗原中加入特定種類的添加劑，如無機鹽、多元醇、蔗糖以及蛋白等。這種方法常用于提高蛋白藥物的穩定性，但是對于病毒顆粒抗原，其結構較一般蛋白藥物更為復雜，對其穩定性影響因素更多，加入無機鹽雖然能一定程度上的提高某些抗原的穩定性，但是無機鹽對這種抗原的穩定性提升作用有限，且高濃度的無機鹽對抗原的活性影響較大；而蛋白和糖類的添加對抗原的活性提升作用通常有限，且成本較高，加入的同時也引入不必要的大分子雜質，影響疫苗的安全性，在實際應用上仍存在較大難度。

因此，提供一種安全、生物相容性高、穩定性優異且制備方法簡單的疫苗抗原組合物具有重要意義。

發明內容