[發明專利]源于巴馬長壽村的鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的標志引物對、鑒定方法及其應用

有效

• 申請號: 201811533437.6
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN109439778B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 張臣臣;張玉律;顧瑞霞;陳大衛;伍云;黃玉軍;黃嘉棣;謝秉鏘;關成冉
• 申請（專利權）人: 揚州大學;皇氏集團股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/06;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/225
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222
• 代理人: 沈志海

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種源于巴馬長壽村的鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的標志引物對。本發明還公開了一種鑒定鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的方法。本發明又公開了上述鑒定方法在發酵制品中鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301存在驗證中的應用。本發明又公開了上述鑒定方法在糞便中鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301存在驗證中的應用。本發明又公開了上述鑒定方法在鼠李糖乳桿菌同種異株混合培養物的菌株計數中的應用。本發明設計的引物對能夠從鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301擴增到穩定條帶，并組成特異性圖譜，且擴增能力穩定，可以作為鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301菌株的標志引物。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及源于廣西巴馬長壽村的益生菌鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的PCR菌株鑒定及其應用。

技術背景

隨著經濟社會的發展和生活節奏的加快，越來越多的人處于亞健康狀態或者患有“富貴病”。近年來，大量的研究表明，乳酸菌是人體腸道中重要的益生菌，對維持宿主腸道的微生態平衡，改善人體代謝機能和免疫系統功能起著至關重要的作用，能夠緩解人體亞健康狀態，甚至治療部分疾病。然而乳酸菌同菌種不同菌株的發酵性能、腸道耐受能力和益生功能差異極大，益生菌的功能研究需要達到菌株水平。源于廣西巴馬長壽村的益生菌鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301益生作用突出，但是由于菌株鑒定較為復雜困難，尚缺少快速有效的手段對其進行快速確認。本發明利用多基因組比對，設計出4對能夠對鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301形成特異性擴增圖譜的標志引物，能夠快速確認鑒定鼠李糖乳桿菌hsryfm1301，并為其他菌株的快速鑒定提供思路。

發明內容

本發明目的在于提供能夠快速鑒定鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的標志引物及其應用，本發明設計的引物對能夠從鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301擴增到穩定條帶，并組成特異性圖譜，且擴增能力穩定，可以作為鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301菌株的標志引物。

本發明通過多菌株全基因組基因家族分析，設計了4對鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的標志引物(引物特性見表1)。經PCR擴增證明，該4對引物能夠對鼠李糖乳桿菌hsryfm1301形成特異性擴增圖譜，具有從大量菌株中確認鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的能力，能夠作為鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的標志引物。

表1標志引物特性

本發明還公開了一種鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的鑒定方法：

(1)提取待測樣本中的DNA；

(2)利用鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301的標志引物對，使用rTaq DNA聚合酶對待測樣本的DNA進行擴增，PCR產物利用1％瓊脂糖凝膠進行電泳；

(3)EB染色之后觀察：

如果hsryfm 1301-1F/R能夠從待測樣本DNA中擴增條帶大小為900bp，和hsryfm1301-2F/R能夠從待測樣本DNA中擴增條帶大小為1100bp，和hsryfm 1301-3F/R能夠從待測樣本DNA中擴增條帶大小為1000bp，和hsryfm 1301-4F/R能夠從待測樣本DNA中擴增條帶大小為800bp，則證明樣本中含有鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301。

優選的，擴增條件見表2：

表2 4對引物的擴增條件和程序

優選的，電泳條件為：120V，300mA，30min。

本發明又公開了上述鑒定方法在發酵制品中鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301存在驗證中的應用。

本發明又公開了上述鑒定方法在糞便中鼠李糖乳桿菌hsryfm 1301存在驗證中的應用。