[發(fā)明專利]麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR的突變體文庫構(gòu)建篩選及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811532883.5
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN110592131B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張大偉;付剛
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N15/75
• 分類號: C12N15/75;C40B50/06;C07K14/32
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

1.一種降低麥芽糖啟動子滲漏表達并提高其誘導(dǎo)表達強度的方法，所述方法包括以下步驟：

1）在枯草芽孢桿菌中敲除麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR；

2）構(gòu)建含有麥芽糖啟動子PmalA，受麥芽糖啟動子PmalA調(diào)控的熒光蛋白，啟動子HpaII以及受HpaII啟動子調(diào)控的麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR基因的載體；

3）對步驟2）所述載體中的麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR基因進行基因突變，構(gòu)建獲得MalR突變體文庫；

4）將步驟3）中的MalR突變體文庫轉(zhuǎn)化步驟1）所構(gòu)建的菌株；

5）對步驟4）所獲得的菌株進行培養(yǎng)，篩選獲得麥芽糖啟動子滲漏表達降低同時誘導(dǎo)表達強度提高的MalR突變體。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光蛋白為綠色熒光蛋白gfp。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.一種麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR突變體，其特征在于，該麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR來源于枯草芽孢桿菌，突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO：2- SEQ ID NO：5之一所示。

5.如權(quán)利要求4所述的麥芽糖激活因子MalR突變體，其特征在于，所述麥芽糖激活因子MalR突變體的原始氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

6.一種如權(quán)利要求1-3任意一項所述方法獲得的麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR突變體或權(quán)利要求4或5所述麥芽糖轉(zhuǎn)錄激活因子MalR突變體在誘導(dǎo)枯草芽孢桿菌麥芽糖啟動子轉(zhuǎn)錄中的應(yīng)用。