[發明專利]一種草菇9715菌株液體菌種培養終點的確認方法

在審

• 申請號: 201811532800.2
• 申請日: 2018-12-14
• 公開（公告）號: CN109628318A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 余昌霞;趙妍;陳明杰;汪虹;李正鵬;奚莉萍;馮愛萍;楊煥玲
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12Q1/04;C12Q1/34;C12Q1/54;G01N33/68;C12R1/645
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

本發明涉及一種草菇9715菌株液體菌種培養終點的確認方法，包括：將草菇的液體培養基中接入母種，進行培養，并取樣進行測定，將測定數據得到變化趨勢圖，確定草菇液體菌種的培養終點。本發明方法涉及草菇液體菌種及培養環境的生理生化指標變化，對液體菌種發酵過程控制具有指示性，能夠有效判斷草菇液體菌種的菌絲活力狀態，能精準確定草菇液體菌種培養終點的時間，取得了較好的效果。

技術領域

本發明屬于草菇液體菌種培育領域，特別涉及一種草菇9715菌株液體菌種培養終點的確認方法。

背景技術

草菇(Volvariella volvacea)，又名蘭花菇、稻草菇、廣東菇和中國菇等，是一種原產于熱帶、亞熱帶高溫多雨地區的腐生性真菌，多生長在稻草、香蕉葉等富含纖維的基質上，營養豐富，富含蛋白質、多糖和纖維素等物質，品質細嫩、味道鮮美，頗受消費者青睞。我國是最早栽培草菇的國家，距今已有300多年的歷史。草菇消費量逐年增加，草菇產業發展潛力巨大。

為適應新形勢下食用菌產業的發展，食用菌液體菌種用于工廠化生產成為研究熱點。液體菌種具有生長迅速、菌齡整齊、制種簡便、使用方便、接種點多、萌發和現蕾快，菇產量高、周期短等優點，同時對于降低生產成本，提高產品質量具有顯著效果。菌種質量是決定栽培成功與否的先決條件，液體菌種最佳培養終點的確定能更好地判斷菌絲活力狀態，進而影響栽培效果。在一些關于液體菌種發酵終點的報道中，常將菌絲體重量作為唯一的衡量指標，然而菌絲生物量與菌絲活力之間并沒有必然聯系。

張一帆等(張一帆,陳多揚,周振輝,等.草菇液體菌種培養過程中的變化和培養終點的研究[J].種子,2012,31(12):9-13,20.)對草菇液體菌種培養過程的變化和培養中終點的研究，針對草菇V23菌株，觀察和測定了草菇液體菌種中菌絲體的外觀、光學顯微結構、菌絲體干重、蛋白質含量及其組成、培養殘液中的含糖量和pH值，并結合栽培出菇產量情況，綜合評價了草菇V23菌株液體菌種的培養終點。其中取樣時間分別為培養5、6、7、8d的菌絲，且各培養時間點上的菌絲體外觀和顯微結構相似，難以區分；通過SDS-PAGE分析蛋白質條帶組成，也無法將各培養時間點的樣品加以區分；最終僅以菌絲體干重、干菌絲體蛋白質含量、培養殘液pH和含糖量結合栽培出菇情況(無明顯差異)，從栽培周轉時間考慮，最終將草菇V23菌株液體菌種搖瓶的最佳培養終點時間為6d。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種草菇9715菌株液體菌種培養終點的確認方法，克服了現有技術如取樣時間分別為培養5、6、7、8d的菌絲，且各培養時間點上的菌絲體外觀和顯微結構相似，難以區分；通過SDS-PAGE分析蛋白質條帶組成，也無法將各培養時間點的樣品加以區分等技術缺陷，本發明通過檢測培養過程中影響草菇液體菌種活性的生理指標，如液體菌種菌絲體干重、蛋白含量，培養液pH、糖度、還原糖含量、酶活性等參數來確定液體菌種的發酵終點，為草菇液體菌種培養過程中的控制及培養終點的判斷提供了可靠的技術參數，并為草菇液體菌種發酵培養的進一步放大和生產利用奠定基礎。

本發明的一種草菇液體菌種培養終點的確認方法，包括：

(1)液體菌種培養及樣品收集：

草菇液體菌種的培養置于合適的三角瓶中，將母種接入草菇的液體培養基中，進行培養，并取樣進行測定；

測定包括：菌絲體質量的測定，培養液的pH值測定，發酵濾液的OD值、糖度測定，還原糖的測定，菌絲體及菌液蛋白質含量測定，漆酶活性測定，羧甲基纖維素酶CL活性測定，半纖維素酶ACX活性測定中的一種或幾種；

(2)將上述測得的數據得到變化趨勢圖，確定草菇液體菌種的培養終點。

步驟(1)中選取250mL三角瓶，培養基裝液量120mL。