[發(fā)明專利]一種草菇9715菌株液體菌種培養(yǎng)終點(diǎn)的確認(rèn)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811532800.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-14
• 公開（公告）號(hào): CN109628318A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余昌霞;趙妍;陳明杰;汪虹;李正鵬;奚莉萍;馮愛萍;楊煥玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12Q1/04;C12Q1/34;C12Q1/54;G01N33/68;C12R1/645
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233
• 代理人: 黃志達(dá)

1.一種草菇9715菌株液體菌種培養(yǎng)終點(diǎn)的確認(rèn)方法，包括：

(1)將草菇的液體培養(yǎng)基中接入母種，進(jìn)行培養(yǎng)，并取樣進(jìn)行測(cè)定；

測(cè)定包括：菌絲體質(zhì)量的測(cè)定，培養(yǎng)液的pH值測(cè)定，發(fā)酵濾液的OD值、糖度測(cè)定，還原糖的測(cè)定，菌絲體及菌液蛋白質(zhì)含量測(cè)定，漆酶活性測(cè)定，羧甲基纖維素酶CL活性測(cè)定，半纖維素酶ACX活性測(cè)定中的一種或幾種；

(2)將上述測(cè)得的數(shù)據(jù)得到變化趨勢(shì)圖，確定草菇液體菌種的培養(yǎng)終點(diǎn)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中液體培養(yǎng)基為葡萄糖25g，酵母粉4g，KH₂PO₄ 1g，MgSO₄ 1g，加蒸餾水定容至1L，調(diào)pH為9.0，裝液量為120mL培養(yǎng)基置于250mL三角瓶中；液體培養(yǎng)基在121℃下滅菌15min，冷卻后待接種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中接入母種具體為：將活化的母種打孔，取菌塊加入無(wú)菌水經(jīng)均質(zhì)儀打碎后，以15mm²為1％的菌種接種量，接入2％的菌液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中培養(yǎng)為32℃、轉(zhuǎn)速125r/min搖床上振蕩培養(yǎng)7d。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中取樣具體為：從48h起，每12h收取一次樣品為一個(gè)處理，每處理5個(gè)重復(fù)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中菌絲體質(zhì)量的測(cè)定：用無(wú)紡布過(guò)濾培養(yǎng)的菌絲，無(wú)菌水沖洗后再用無(wú)菌吸水紙吸干水分，于-20℃冰箱冷凍過(guò)夜，轉(zhuǎn)入最低溫保持在-50℃左右的冷凍干燥機(jī)中充分干燥至恒重，用分析天平稱量菌絲體干重。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中pH值測(cè)定：用pH計(jì)測(cè)量培養(yǎng)液的pH值；發(fā)酵濾液的OD值在波長(zhǎng)540nm處測(cè)定。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中還原糖的測(cè)定為：采用3,5-二硝基水楊酸3,5-dinitrosalicylic acid,DNS法在波長(zhǎng)540nm下測(cè)定；菌絲體及菌液蛋白質(zhì)含量測(cè)定：采用考馬斯亮藍(lán)法，在波長(zhǎng)595nm處測(cè)定。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(1)中漆酶活性測(cè)定：取發(fā)酵濾液為樣品，用漆酶試劑盒測(cè)定菌液中的漆酶活性；羧甲基纖維素酶CL活性測(cè)定：取發(fā)酵濾液為樣品，用羧甲基纖維素酶試劑盒測(cè)定菌液中的纖維素酶活性；半纖維素酶ACX活性測(cè)定：取發(fā)酵濾液為樣品，用半纖維素酶試劑盒測(cè)定菌液中的半纖維素酶活性。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟(2)中測(cè)得的數(shù)據(jù)采用Excel 2013進(jìn)行分析做圖，得到菌絲活性變化趨勢(shì)圖，綜合評(píng)價(jià)各指標(biāo)確定草菇液體菌種的培養(yǎng)終點(diǎn)。