[發明專利]一種包含腫瘤抗原識別受體的免疫細胞及其應用

在審

• 申請號: 201811527903.X
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109913422A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 王征;徐云霞
• 申請（專利權）人: 蘇州康聚生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;呂學辰

本發明公開了一種包含腫瘤抗原識別受體的免疫細胞及其應用。所述包含腫瘤抗原識別受體的免疫細胞表達透明質酸酶，所述透明質酸酶為：a)錨定于所述免疫細胞上的全長蛋白；或b)分泌至所述免疫細胞外的可溶型蛋白。本發明還公開所述的免疫細胞在制備治療腫瘤藥物中的應用。本發明的包含腫瘤抗原識別受體的免疫細胞，可以改變微環境的細胞外基質結構正常化腫瘤免疫微環境的效果，從而使得其可以有效接近并殺死腫瘤細胞。在可溶性PH20蛋白的幫助下，包含腫瘤抗原識別受體的免疫細胞也能改善腫瘤微環境，有效殺死腫瘤細胞。

技術領域

本發明屬于細胞免疫治療領域，具體涉及一種包含腫瘤抗原識別受體的免疫細胞及其應用。

背景技術

癌癥，又稱惡性腫瘤，它是嚴重危害人類健康、導致現代人類死亡的第一大惡疾和頑癥。據聯合國統計數據顯示，目前全球平均每8個死亡病例中就有1人死于癌癥，這比艾滋病、結核病和瘧疾導致的死亡人數還要高。而且每年全球還有1000多萬人被確診患上癌癥(世界衛生組織發布的《2014年世界癌癥報告》)。

一直以來，腫瘤治療的基礎都是手術、化療以及放療。然而傳統的治療方式僅能延長惡性腫瘤患者的生存期，治愈的可能性很低，惡性腫瘤依然是“絕癥”。在過去20年中，通過特異性識別腫瘤細胞表面特異性蛋白、從而殺死腫瘤細胞的靶向療法比如西妥昔單抗和曲妥珠單抗治療方法，使得它們成為很多癌癥的標準治療方法，然而上述方法并不能夠有效治療實體瘤。但在過去幾年中，免疫療法，一種通過招募并加強病人的免疫系統以攻擊腫瘤的方法，已經成為腫瘤治療方法的第5大支柱。其中，最熱門且目前最接近FDA獲批的治療方法為CAR-T細胞治療方法。然而，直到最近，CAR-T細胞治療法一直局限于小規模的臨床試驗，并且大部分是用于晚期血液癌癥的治療，而除淋巴瘤以外的惡性實體腫瘤效果不佳。

CAR-T細胞用于實體瘤治療的最大障礙在于腫瘤免疫抑制微環境，是腫瘤發生發展過程中形成的內環境。惡性實體腫瘤主要由癌/瘤細胞和基質細胞(例如成纖維細胞和炎癥細胞)細胞外基質及血管/淋巴管構成。與正常組織相比，腫瘤組織中的基質細胞、細胞外基質和血管/淋巴管系統一般是異常的，具有增加數目的成纖維細胞，并且血管系統呈現出高度分支或卷曲的結構。腫瘤和基質細胞產生并裝配細胞外基質組分(膠原蛋白、蛋白聚糖、透明質酸)形成致密團塊(Clin Oncol 31:2205-2218.2013)。以上因素造成了腫瘤組織結構致密、營養缺乏、pH偏低、缺氧，抑制了CAR-T細胞有效發揮腫瘤殺傷作用。

想要有效治療腫瘤，CAR-T細胞必須能夠克服上述微環境，進入到腫瘤組織、在腫瘤組織中存活并對腫瘤細胞進行殺傷。

盡管可能已經產生了針對腫瘤微環境的CAR-T細胞，即表達透明質酸酶PH20的CAR-T細胞(專利CN107400664A)，但是這種細胞產生的技術手段存在問題，發揮殺傷作用的原理及技術效果未得到揭示。首先，在透明質酸酶的設計上，CN107400664A認為：在自然狀態下，透明質酸酶是以分泌蛋白質形式(即游離透明質酸酶)而不是以跨膜蛋白質的形式表達，這種分泌型透明質酸酶或者透明質酸酶跨膜融合蛋白質基因序列中的透明質酸酶編碼序列可以是全部蛋白質編碼序列，也可以是含有編碼透明質酸酶活性的部分序列。但未公布制備分泌透明質酸酶PH20CAR-T細胞的技術手段，且指出了與游離型擴散的透明質酸酶相比較，跨膜型透明質酸酶療效更好。