[發明專利]一種包含腫瘤抗原識別受體的免疫細胞及其應用

在審

• 申請號: 201811527903.X
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109913422A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 王征;徐云霞
• 申請（專利權）人: 蘇州康聚生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;呂學辰

1.一種包含腫瘤抗原識別受體的免疫細胞，其表達透明質酸酶，其特征在于，所述透明質酸酶為：

a)錨定于所述免疫細胞上的全長蛋白；或

b)分泌至所述免疫細胞外的可溶型蛋白。

2.如權利要求1所述的免疫細胞，其特征在于，所述的b)優選為a)缺失了羧基端膜結構后獲得；較佳地，所述的透明質酸酶為哺乳動物睪丸透明質酸酶，更佳地為人透明質酸酶HYAL1、HYAL2、SPAM1或者PH20；進一步更佳地：

所述a)的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示；編碼所述a)的核苷酸序列優選如序列表中SEQ ID NO.2或者SEQ ID NO.3所示；

所述b)的氨基酸序列為如序列表中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的第1～447位；編碼所述b)的核苷酸序列優選為如序列表中SEQ ID NO.2或者SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的第1～1341位。

3.如權利要求1所述的免疫細胞，其特征在于，所述的腫瘤抗原識別受體為嵌合抗原受體(CAR)或者T細胞受體(TCR)，較佳地：

所述的TCR包含TCR的α鏈、TCR的β鏈、TCR的γ鏈和TCR的δ鏈中的一種或多種，所述α鏈包含可變區和恒定區；較佳地，所述可變區為人TCRα鏈的可變區，所述恒定區為鼠α鏈的恒定區；所述β鏈包含可變區和恒定區，所述可變區為人TCRβ鏈的可變區，所述恒定區為鼠β鏈的恒定區；更佳地，所述的TCR為E6TCR；

和/或，所述的CAR的胞內區包括人的4-1BB胞內區和/或人的CD28胞內區，以及人的CD3ζ胞內區，優選為人的4-1BB胞內區、人的CD28胞內區，以及人的CD3ζ胞內區；

和/或，所述的CAR的鉸鏈區為人的CD8α鉸鏈區、跨膜區為人的CD8α跨膜區。

4.如權利要求3所述的免疫細胞，其特征在于，所述CAR或者所述TCR識別的抗原為ROR1、GPC3、MSLN或者EpCAM；所述腫瘤抗原識別區為能夠結合以上腫瘤抗原的區域，優選scFv；較佳地：

識別所述ROR1的scFv的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4所示，

或者，識別所述GPC3的scFv的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.5所示，

或者，識別所述EpCAM的scFv的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.6所示。

5.如權利要求1～4任一項所述的免疫細胞，其特征在于，表達所述透明質酸酶的基因與所述CAR或者所述TCR位于同一個表達載體上，或者分別位于不同的表達載體上；較佳地：

所述TCR或者所述CAR通過DNA或者mRNA形式導入至細胞；

所述表達載體為動物病毒，優選慢病毒；

和/或，所述透明質酸酶、所述CAR以及所述TCR中的一種或多種的表達受到有活性的啟動子的控制，所述的啟動子優選EF1α啟動子。

6.如權利要求5所述的免疫細胞，其特征在于，

在所述位于同一個表達載體上的情況下，所述的表達載體包括以下表達單元：信號肽+scFv+人CD8α鉸鏈區+人CD8α跨膜區+人4-1BB胞內區+人CD3ζ胞內區+連接肽+透明質酸酶，其中，所述信號肽位于5’端，所述透明質酸酶位于3’端；或者，E6TCR+連接元件+透明質酸酶，其中，所述E6TCR位于5’端，所述透明質酸酶位于3’端；

在所述位于不同的表達載體上的情況下，其中一個所述表達載體包括以下表達單元：信號肽+scFv+人CD8α鉸鏈區+人CD8α跨膜區+人4-1BB胞內區+人CD3ζ胞內區，另一個所述表達載體包括以下表達單元：透明質酸酶+連接元件+標簽蛋白，其中，所述的透明質酸位于5’端，所述的標簽蛋白位于3’端；

所述的連接元件優選T2A連接肽、P2A連接肽、E2A連接肽、F2A連接肽或者IRES元件；

所述的標簽蛋白優選tEGFR。