[發明專利]一種細菌性角膜炎動物模型及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201811527374.3
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109820875A
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 孫曉東;朱鴻;黃海清;胡潔;汪楓樺;閆泉;翟元琦
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫院
• 主分類號: A61K35/74
• 分類號: A61K35/74;A61K49/00
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 莊文莉

本發明提供了一種細菌性角膜炎動物模型及其構建方法和應用，所述構建方法包括以下步驟：S1、麻醉下在實驗小鼠的眼球角膜表面劃三條平行切口，深度割破角膜上皮層但不超過角膜內皮層，在角膜切口區域滴加1?10ul攜帶熒光標記基因的綠膿桿菌懸液，靜置后自然復蘇；S2、將經步驟S1處理后的實驗小鼠每日進行觀察角膜感染情況，并檢測角膜熒光情況。該構建方法簡便，并可成功建立穩定的細菌感染性角膜炎動物模型；且采用攜帶熒光標記基因的綠膿桿菌感染活體角膜組織，可在生物活體熒光成像系統下實時定量觀察角膜感染情況，進而可廣泛應用于細菌感染性角膜炎的致病機制、治療效果評價等多方面的研究。

技術領域

本發明涉及眼科醫學模型領域，具體地說，涉及一種細菌性角膜炎動物模型及其構建方法和應用。

背景技術

細菌性角膜炎是一種致盲性眼病，其危險因素包括眼外傷、角膜接觸鏡佩戴、眼部手術、干眼癥、激素類藥物長期使用以及機體免疫功能低下。細菌性角膜炎常見致病菌主要有綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌等。細菌性角膜炎需要及時治療以減輕角膜組織的損害、減少角膜瘢痕形成，進而預防進一步的視力損害。隨著抗生素的廣泛使用，目前由耐藥性細菌感染造成的細菌性角膜炎屢見不鮮，如何有效控制這類角膜炎感染病情是亟待解決的臨床問題。因而，構建細菌性角膜炎動物模型，對于細菌性角膜炎相關的基礎研究以及未來的臨床轉化，均具有十分重要的意義。

目前常用的感染性角膜炎模型多為損傷性，主要有角膜劃痕法、角膜環鉆法、基質注射法等，目的是造成角膜基質層損傷，便于細菌自角膜表面侵襲感染。但這些模型最大的不足之處在于，如需檢測角膜感染情況，則需要先處死實驗動物取出角膜后，才能進行細菌學檢測，無法在活體上實時連續監測，不利于角膜炎治療相關研究的觀察分析。因而亟需建立一種可實時監測角膜感染情況的角膜炎動物模型。

發明內容

本發明要解決的技術問題是，針對現有技術不足，提供一種細菌性角膜炎動物模型及其構建方法和應用。該菌性角膜炎動物模型的構建方法簡便、高效，并且能在生物活體熒光成像系統下實時定量觀察角膜炎情況，進而可廣泛應用于細菌感染性角膜炎的致病機制、治療效果評價等多方面的研究。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

本發明提供了一種細菌性角膜炎動物模型的構建方法，包括以下步驟：

S1、麻醉下在實驗小鼠的眼球角膜表面劃三條平行切口，深度為割破角膜上皮層但不超過角膜內皮層，在角膜切口區域滴加1～10ul綠膿桿菌懸液，靜置后自然復蘇；

S2、將經步驟S1處理后的實驗小鼠每日進行觀察角膜感染情況，并檢測角膜熒光情況。

優選地，步驟S1中，所述實驗小鼠為無眼部疾患的雌性健康小鼠；雌性小鼠不易激惹，便于后續多次麻醉成像進行觀察。

優選地，步驟S1中，所述綠膿桿菌懸液中的細菌量為1×10⁵CFU～1×10⁶CFU。所述細菌量過低不容易造成有效的角膜感染濃度過高容易出現嚴重感染引起眼內炎而超出角膜感染模型的范疇，因此細菌量濃度過低或過高都不利于控制該動物模型的穩定性。

優選地，步驟S1中，所述綠膿桿菌懸液的制備方法如下：將攜帶熒光標記基因的綠膿桿菌菌株ATCC 19660，在腦心浸液肉湯中37℃搖晃孵育過夜，4000rpm離心后，加入PBS溶液重懸即得。

優選地，所述腦心浸液肉湯中含有濃度為10～100ug/ml的卡那霉素。

優選地，所述步驟S2中，采用生物活體熒光成像系統檢測實驗小鼠角膜熒光情況，并對熒光圖像進行定量分析。

本發明還提供了一種根據前述方法構建的細菌性角膜炎動物模型。

本發明還提供了一種細菌性角膜炎動物模型在研究細菌性角膜炎中的應用。