[發明專利]一種篩選在乳中生長的乳酸菌的培養基及其方法

在審

• 申請號: 201811525229.1
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109401976A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 鄢明輝;游春蘋;劉振民;扶曉菲;桂敏
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12R1/01
• 代理公司: 北京東正專利代理事務所(普通合伙) 11312
• 代理人: 李夢福

本發明提供了一種篩選在乳中生長的乳酸菌的培養基，該培養基包含以下含量的組分：脫脂乳粉8?12g或鮮乳8?12ml、瓊脂粉1.5?2.5g、花青素提取液0.8?1.2ml，補水至100ml。本發明的篩選方法能簡便、快速、直觀地篩選出在乳中生長的乳酸菌；利用花青素顏色對pH值的敏感性來特異性辨識能在乳平板上生長的乳酸菌；當有乳酸菌在乳平板上生長時，會因為產酸而使菌落周圍的pH值降低，從而使得培養平板出現粉紅色；藍色背景上出現的粉紅色菌落與背景對比突出，易于分辨，從而可以方便、快速地辨識出能在乳中生長的乳酸菌；此外，花青素能夠促進在乳中生長的乳酸菌的繁殖，提高陽性菌株的檢出概率。

技術領域

本發明屬于微生物的技術領域，具體涉及一種篩選在乳中生長的乳酸菌的培養基及其方法。

背景技術

傳統發酵食品具有對人體有健康益處的微生物，是現代食品工業重要的發酵劑來源。從傳統食品等來源分離篩選具有優良發酵性能的菌種是現代乳品發酵劑研究的重要方向。現階段乳品發酵劑的篩選主要以MRS平板對乳酸菌進行選擇性篩選，這一方法的問題是，篩選得到的乳酸菌菌株大多數在乳中生長困難或基本不生長，如現有的大多數益生性的乳桿菌及雙歧桿菌菌株。而由于乳的背景干擾，直接用脫脂乳平板又面臨生長出來的菌落不明顯、難以甄別等問題。上述問題嚴重限制了新型乳品發酵劑的篩選。因此，現階段需要一種高效、便捷的方法來篩選能夠在乳中生長的乳酸菌。

花青素(anthocyanidins)是自然界一類廣泛存在于植物中的水溶性天然色素，是花色苷(anthocyains)水解而得的有顏色的背元。花青素作為食品著色劑應用于平常飲料和食品，符合人們對食品添加劑天然、安全、健康的總要求。

因此，通過將花青素添加到培養基中，以高效、便捷地來篩選能夠在乳中生長的乳酸菌，是本領域亟待解決的技術問題。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明的目的在于通過將花青素添加到培養基中，獲得一種篩選在乳中生長的乳酸菌的培養基及其方法。

具體的，一方面，提供了一種篩選在乳中生長的乳酸菌的培養基，該培養基包含以下含量的組分：脫脂乳粉8-12g或鮮乳8-12ml、瓊脂粉1.5-2.5g、花青素提取液0.8-1.2ml，補水至100ml；

其中，該花青素提取液由以下方法制備獲得：將黑枸杞粉碎后過篩，加入蒸餾水，室溫下靜置提取2.5-3.5h，過濾后在濾渣中加入蒸餾水，45-50℃提取0.8-1.2h，過濾，合并兩次濾液；將合并后的濾液真空減壓濃縮至濃度1.3-1.4g/ml，經超濾、臭氧殺菌后，即得。

進一步的，黑枸杞粉碎后過20目篩，加入其8-12質量倍的蒸餾水，過濾后的濾渣中加入其5-8質量倍的蒸餾水。

進一步的，真空減壓濃縮的溫度為45-55℃。

進一步的，使用0.22μm濾膜進行超濾，在臭氧量4mg/m³下殺菌25-35min。

第二方面，還提供了一種使用所述的培養基篩選在乳中生長的乳酸菌的方法，該方法包括以下步驟：

(1)將所述培養基混合均勻后倒入平板中，凝固后冷卻，得到乳平板；

(2)將含有待測菌的稀釋液均勻涂布于步驟(1)的乳平板上，置于厭氧培養箱，30-40℃培養過夜；

(3)培養后，如果培養基平板上有菌落周圍出現顏色變化，就斷定該菌落為能在乳中生長的乳酸菌。

進一步的，步驟(2)中，培養的時間為24-32h。

進一步的，步驟(3)中，菌落周圍的顏色由深藍色變為粉紅色。

本發明的有益效果為：