[發明專利]一種連續流層析上樣量的確定方法及其應用

有效

• 申請號: 201811524322.0
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109473143B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 張趕;富敏霞;梁泊寧
• 申請（專利權）人: 杭州奕安濟世生物藥業有限公司
• 主分類號: G16B25/00
• 分類號: G16B25/00;G16B40/00;C07K1/16
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王煥

本發明涉及抗體純化技術領域，尤其是涉及一種連續流層析上樣量的確定方法及應用。連續流層析上樣量的確定方法，包括如下步驟：將目標蛋白純品制成上樣液，上樣獲取穿透曲線；按照公式計算蛋白穿透量獲取穿透曲線中C/C₀＝a的數據點對應的DBC為穿透載量b；獲取蛋白穿透量P_n＝100b±10或P_n＝200b±10時的數據點對應的X，上樣量為γ(X?b)或γ(X?2b)；其中，a≤5％，0.8≤γ≤1。本發明能夠準確給出不同條件下的上樣量，以兼顧收率和填料載量，可用于各類蛋白的分離純化等，確定方法簡單，無需積分處理等軟件，具有便利性、操作學和易學性。

技術領域

本發明涉及抗體純化技術領域，尤其是涉及一種連續流層析上樣量的確定方法及應用。

背景技術

隨著生物制藥技術的進步，尤其是上游細胞發酵的技術發展，抗體表達量逐漸升高，從之前的零點幾克每升至現在的多達30克每升，由此給下游純化帶來很大的壓力。目前制約下游純化的最大障礙是捕獲步驟的填料成本高以及生產效率較低。抗體的粗純步驟目前主要是通過Protein A親和層析來進行捕獲，而廣泛使用的Protein A填料普遍存在價格高昂，載量不高等問題。

生物制藥界提出了很多種解決方案，如膜層析，新填料，連續流層析等等。其中連續流層析是目前較為成熟且能有效降低成本提高生產效率的一種方法。連續流層析是通過將一根長的層析柱拆分成幾根層析柱運行。通過兩根層析柱串聯使用，第一根柱子在目標蛋白開始流穿后，會有第二根新柱子來承接，從而提高柱子的載量，降低填料成本。而除了兩根上樣的柱子之外，還會有載滿的柱子在執行洗脫和再生的步驟，從而提高生產效率。同時為了獲得更快的流速，可以將柱高裝短，從而大大的提高生產效率。

目前很多公司都開發了連續流層析設備，如GE公司的AKTA PCC，Pall公司的Cadence BioSMB，Chromacon公司的CaptureSMB，大多數的設備都可以用來做Protein A捕獲。而Protein A捕獲步驟目前主要有兩種，一種是固定體積上樣，如Pall公司的CadenceBioSMB。另一種是動態控制上樣，如GE公司的AKTA PCC通過ΔUV控制上樣，Chromacon公司的CaptureSMB通過Automab控制上樣。在連續流捕獲工藝中，常常用一根未載樣的柱子串聯接在已載滿或即將載滿的柱子后面，由于第一根柱子已經滿載，所以上樣液中的目標蛋白會有一部分未被第一根柱子結合而被第二根未載滿的柱子捕獲。但是如果樣品上的過多，會導致第二根柱子也開始發生流穿。所以上樣量對于連續流工藝是很重要的參數，上的太多會導致第二根柱子也發生流穿，從而導致樣品的流失。上的太少不能最大化的利用填料的載量，使得成本不能降至最低。所以對于連續流層析工藝開發來說，找出上樣量的操作范圍很重要。然而，現有的連續流層析技術中，并不能夠給出上樣量的范圍進行參考。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種連續流層析上樣量的確定方法，以解決現有技術中存在的連續流層析中無法確定合適的上樣量的技術問題。

本發明的第二目的在于提供一種連續流層析上樣量的確定方法的應用，根據本發明的方法確定連續流層析上樣量，可用于各類蛋白的分離純化。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種連續流層析上樣量的確定方法，包括如下步驟：

將目標蛋白純品制成上樣液，上樣獲取穿透曲線，穿透曲線的X軸為DBC，Y軸為C/C₀；其中，C₀為上樣液的紫外吸收值，C為流出液的紫外吸收值；