[發明專利]一種連續流層析上樣量的確定方法及其應用

有效

• 申請號: 201811524322.0
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109473143B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 張趕;富敏霞;梁泊寧
• 申請（專利權）人: 杭州奕安濟世生物藥業有限公司
• 主分類號: G16B25/00
• 分類號: G16B25/00;G16B40/00;C07K1/16
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王煥

1.一種連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，包括如下步驟：

將目標蛋白純品制成上樣液，上樣獲取穿透曲線，穿透曲線的X軸為動態結合載量，Y軸為C/C₀；其中，C₀為上樣液的紫外吸收值，C為流出液的紫外吸收值；

按照公式計算蛋白穿透量S_i＝(X_i-X_i-1)·(Y_i+Y_i-1)/2；其中X_i和X_i-1分別為穿透曲線中相鄰數據點對應的動態結合載量，Y_i和Y_i-1分別為穿透曲線中相鄰數據點對應的C/C₀，n為正整數；

獲取穿透曲線中C/C₀＝a的數據點對應的動態結合載量為穿透載量b；獲取蛋白穿透量P_n＝100b±10或P_n＝200b±10時的數據點對應的X，上樣量為γ(X-b)或γ(X-2b)；其中，a≤5％，0.8≤γ≤1；

所述連續流層析的方式選自一柱拖一柱、一柱拖二柱、二柱拖二柱的上樣方式；

當連續流層析的方式為一柱拖一柱串聯方式時，蛋白穿透量P_n＝100b±10時的數據點對應的X，上樣量為γ(X-b)；當連續流層析的方式為一柱拖二柱串聯方式時，蛋白穿透量P_n＝200b±10時的數據點對應的X，上樣量為γ(X-2b)；當連續流層析的方式為二柱拖二柱串聯方式時，蛋白穿透量P_n＝100b±10時的數據點對應的X，上樣量為γ(X-b)；

其中γ作為安全系數，避免實際操作造成的流穿，導致樣品的流失。

2.根據權利要求1所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，所述γ滿足：0.9≤γ≤1。

3.根據權利要求2所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，所述γ＝0.9。

4.根據權利要求2所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，根據所述穿透曲線獲取數據點，每1mL所述上樣液，所述數據點的數量＞300個。

5.根據權利要求1所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，所述a≤3％。

6.根據權利要求5所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，所述a≤2％。

7.根據權利要求6所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，所述a≤1％。

8.根據權利要求1所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，將所述目標蛋白純品制成上樣液，上樣直至C/C₀≥80％時，停止上樣。

9.根據權利要求8所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，將所述目標蛋白純品制成上樣液，上樣直至C/C₀≥85％時，停止上樣。

10.根據權利要求1所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，將所述目標蛋白純品制成上樣液，所述上樣液的pH值與待分離目標蛋白粗品的pH值之比為0.97﹕1～1.03﹕1。

11.根據權利要求10所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，所述上樣液的pH值與待分離目標蛋白粗品的pH值之比為0.98﹕1～1.02﹕1。

12.根據權利要求11所述的連續流層析上樣量的確定方法，其特征在于，所述上樣液的pH值與待分離目標蛋白粗品的pH值之比為1﹕1。